大豆DREB基因的功能分析及互作蛋白的篩選和鑒定.pdf

1、DREB轉(zhuǎn)錄因子廣泛存在于各種植物中，參與調(diào)控各種與抗逆相關(guān)的功能基因的表達(dá)，在抗逆脅迫中發(fā)揮著重要的作用。 本研究對轉(zhuǎn)GmDREB5基因煙草進(jìn)行耐旱性鑒定，結(jié)果表明，GmDREB5基因的過表達(dá)提高了轉(zhuǎn)基因煙草對干旱的抗性。對轉(zhuǎn)GmDREB3基因的擬南芥進(jìn)行耐低溫鑒定，結(jié)果表明，GmDREB3基因在植物中過表達(dá)能夠顯著提高擬南芥對低溫的抵御能力。 轉(zhuǎn)基因小麥抗旱性鑒定的結(jié)果顯示，GmDREB1基因、GmDREB3和GhD

2、REB基因的過表達(dá)能夠明顯提高小麥的耐旱性，不同轉(zhuǎn)基因小麥株系之間對干旱的耐性存在差異。PCR檢測結(jié)果證明這些基因在抗旱性強(qiáng)的小麥株系中能夠穩(wěn)定遺傳，且在抵御逆境脅迫中發(fā)揮了重要的作用?？购缔D(zhuǎn)基因小麥株系的獲得對于提高我國主栽小麥品種的抗旱性以及利用DREB基因提高其他作物的抗旱性具有重要的意義。 DREB轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控下游基因表達(dá)的同時，其活性也受到很多其他與之相互作用的蛋白的調(diào)控。本研究利用酵母雙雜交系統(tǒng)從干旱處理5h的大豆c

3、DNA文庫中篩選與GmDREB5的互作蛋白。通過高嚴(yán)謹(jǐn)度的營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基篩選，獲得了580個酵母克隆，采用不同方式對獲得克隆進(jìn)行反復(fù)鑒定，結(jié)果表明，陽性克隆GmGβ1、GmTPRI、GmE2、GmLC1和GmPSI與GmDREB5在酵母體內(nèi)具有強(qiáng)烈的相互作用。采用RT-PCR方法分析了編碼互作蛋白的基因在逆境脅迫下的表達(dá)特性，結(jié)果表明這些基因均受到干旱，低溫，高鹽，ABA的誘導(dǎo)，但是受誘導(dǎo)的時間有差異。同源性比對分析表明，獲得的互作蛋