暴發(fā)性肝衰竭腸道樹突狀細胞的變化.pdf

1、目的:暴發(fā)性肝衰竭是一種嚴重的肝細胞短時間內(nèi)大量壞死或肝臟功能異常的肝臟損傷綜合征，其常見并發(fā)癥為自發(fā)性細菌性腹膜炎，自發(fā)性腹膜炎是由于腸道細菌過度集聚和腸道細菌移位引起的，而腸道細菌移位的典型病理特征為腸道通透性增加和腸道黏膜的破壞。樹突狀細胞(DCs)在調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答以及監(jiān)視腸道免疫內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)過程中扮演重要角色，作為專職抗原提呈細胞腸道黏膜的變化與DCs息息相關(guān)。因此通過檢測腸道DCs的變化可以了解腸道黏膜的繼發(fā)改變，為控制并發(fā)癥保護

2、肝損傷尋找新的切入點。
　　方法:制備暴發(fā)性肝衰竭小鼠模型;取小鼠小腸組織，0.9％生理鹽水沖洗后一部分4％多聚甲醛固定用于免疫組化染色，其余部分-80℃凍存用于Western Blot和RealtimePCR檢測。其中CD11b/c、CD86、CD74和CD3采用免疫組化、Western Blot和Real time PCR方法檢測;而CD83采用免疫組化和Real time PCR的方法檢測。
　　結(jié)果:模型組(FHF,

3、D-Galn+LPS)小鼠的一般活動狀態(tài)發(fā)生改變，從第6小時開始出現(xiàn)死亡，9小時死亡率達到20％。免疫組化染色顯示，F(xiàn)HF組CD11b/c不同于NS組僅分布在基底層，還分布在淋巴管，并且CD11b/c和CD83陽性明顯增多，CD11b/c和CD83積分光密度值(IOD)分別為:FHF組7988400±385941和13875000±467493、D-Galn組7262400±332512和10794000±256612、LPS組6716

4、500±338314和12494000±532134、NS組1102400±132273和9257600±400364。與NS組相比，F(xiàn)HF、LPS和D-Galn組的CD11b的蛋白表達明顯升高，CD11b的蛋白相對表達量為:D-Galn組3.888±1.39、LPS組7.7091±1.10、FHF組5.4817±0.77、NS組1.4073±0.37;此外CD11b在基因水平屬于整合素家族，CD11b為整合素α(Itg-α)，我們的研

5、究結(jié)果顯示Itg-α和CD83mRNA明顯升高，其中Itg-αmRNA和CD83mRNA相對表達量分別為:FHF組1.1224±0.3和3.6986±0.40、D-Galn組1.1347±0.24和2.4554±0.46、LPS組1.2301±0.17和2.8982±0.31、NS組0.4907±0.19和1.0762±0.22，由此我們可以推斷出DCs在FHF條件下，大量成熟。另外免疫組化染色檢測DCs表達的共刺激分子CD86，結(jié)果顯

6、示其陽性明顯升高，IOD值分別為:D-Galn組7262400±332512、LPS組6716500±338314、FHF組7988400±385941、NS組1102400±132273;CD86蛋白相對表達量為:D-Galn組2.9042±0.53、LPS組2.7299±0.47、FHF組4.2673±0.69、NS組1.1379±0.42，CD86mRNA相對表達量為:D-Galn組1.5413±0.33、LPS組1.5472±0

7、.18、FHF組1.5801±0.32、NS組0.8846±0.10(p＜0.05)，說明發(fā)生FHF時腸道DCs發(fā)揮了生物學(xué)效應(yīng)。與DCs生物學(xué)效應(yīng)相關(guān)的還有主要組織相容性復(fù)合體分子途徑，因此我們檢測了MHCⅡ類分子途徑的不變鏈CD74，結(jié)果顯示CD74電明顯升高，CD74組化染色IOD值為:FHF組11056000±431427、D-Galn組9109100±272745、LPS組11278000±396031、NS組4633400±

8、267903;CD74相對蛋白表達量為:FHF組2.3513±0.52、D-Galn組2.2994±0.72、LPS組2.3891±0.47、NS組1.1298±0.33;CD74mRNA相對表達量為:FHF組1.5383±0.26、D-Galn組1.4337±0.31、LPS組1.7559生0.24、NS組0.7648±0.22，(p＜0.05)。最后驗證了效應(yīng)T細胞的特異性表面標記CD3，發(fā)現(xiàn)CD3的表達也明顯升高，且FHF組CD3

9、表達明顯高于其他組，其中CD3組化染色IOD為:FHF組1901600±60252、D-Galn組671520±22440、LPS組775098±29981、NS組75410±103860;CD3蛋白相對表達量為:FHF組1.6782±0.09、D-Galn組0.7418±0.03、LPS組1.5929±0.05、NS組0.3864±0.02;CD3mRNA相對表達量為:FHF組2.2842±0.23、D-Galn組2.2412±0.1