豬和牛CNR的分子克隆及其配體對cAMP信號通路的影響.pdf

1、豬和牛CNR的分子克隆及其配體對cAMP信號通路的影響PigandcattlecannabinoidreceptorsgenecloningandtheeffectoftheirligandsoncAMPsignalingpathway研究生：孫艷君專業(yè)：基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)導(dǎo)師：王志強副教授張湯杰教授揚州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院2014年6月II一揚州大學(xué)碩士學(xué)位論文染至HEK293T細(xì)胞，用蛋白免疫印跡(Westernblot)檢測pCNRl，cCNRl

2、和cCNR2的表達(dá)情況，結(jié)果成功表達(dá)目的蛋白。以脂質(zhì)體法分別將熒光素酶報告基因質(zhì)粒pGL4與真核表達(dá)載體pcDNA31()myc／pCNRl，pcDNA31()myc／cCNRl和pcDNA31()myc／cCNR2共轉(zhuǎn)染至HEK293T細(xì)胞，24h后加入不同濃度的激動劑和反向激動劑(2AG和PEA為激動劑，AM281和AM630為反向激動劑)，結(jié)果得到，2AG和PEA單獨作用時可分別抑制表達(dá)pCNRl，cCNRl和cCNR2的細(xì)胞內(nèi)c

3、AMP信號通路，而同時加入一定濃度的Forskolin卻可得到相反的結(jié)果，表達(dá)pCNRl和cCNRl的細(xì)胞內(nèi)cAMP水平會隨著2AG濃度的增加而增加，但Forskolin和PEA共同作用于表達(dá)cCNR2的細(xì)胞卻未得到同樣的結(jié)果，另外，本試驗發(fā)現(xiàn)，當(dāng)2AG濃度達(dá)到10。5M時，會使表達(dá)pCNRl和cCNRl的細(xì)胞內(nèi)cAMP水平忽然升高；而AM281和AM630無論是單獨作用還是與Forskolin共同作用，結(jié)果都是在一定濃度范圍內(nèi)隨著AM