蒲公英水提物對(duì)豬鏈球菌生物被膜體外干預(yù)作用.pdf

1、豬鏈球菌病是由豬鏈球菌(Streptococcus suis)引起的一種常見(jiàn)傳染病，豬鏈球菌在機(jī)體內(nèi)易形成生物被膜，抵抗宿主免疫系統(tǒng)的清除，可以持續(xù)性定植，引起慢性反復(fù)性感染，難以控制。蒲公英(Dandelion)是一種常見(jiàn)的清熱解毒中藥，其主要活性成分為綠原酸，具有廣譜的抗菌消炎作用。通過(guò)蒲公英提取物對(duì)體外豬鏈球菌干預(yù)，探討蒲公英對(duì)豬鏈球菌的抗菌作用及對(duì)生物被膜形成的干預(yù)作用，為蒲公英防治豬鏈球菌病及其作用機(jī)制提供依據(jù)。
　　試

2、驗(yàn)方法:采取L9(34)正交實(shí)驗(yàn)法，以水和乙醇作為蒲公英的提取溶劑，抑菌效果為參照，水提考察料液比、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)三因素對(duì)提取抑菌活性成分的影響;醇提考察料液比、乙醇濃度、pH三因素對(duì)提取抑菌活性成分的影響，最終確定蒲公英抑菌成分的最佳提取工藝。對(duì)抑菌活性高的提取組分，以綠原酸為對(duì)照品，利用高效液相色譜對(duì)其提取物中綠原酸含量進(jìn)行測(cè)定。通過(guò)微量肉湯稀釋法分別測(cè)定蒲公英提取物和綠原酸對(duì)豬鏈球菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MB

3、C)。應(yīng)用卡爾加里生物被膜形成裝置，采用結(jié)晶紫染色(CV)，利用酶標(biāo)儀測(cè)定豬鏈球菌生物被膜的形成能力。采用1/2、1/4、1/8、1/16、1/32MIC蒲公英提取物及1/2、1/4、1/8、1/16、1/32MIC綠原酸對(duì)豬鏈球菌生物被膜形成進(jìn)行干預(yù)實(shí)驗(yàn)，測(cè)定二者對(duì)豬鏈球菌生物被膜形成是否有干預(yù)作用;應(yīng)用掃描電鏡(SEM)檢測(cè)蒲公英提取和綠原酸對(duì)豬鏈球菌生物被膜形成的形態(tài)學(xué)影響。
　　試驗(yàn)結(jié)果:采用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)法，優(yōu)化蒲

4、公英提取物對(duì)豬鏈球菌抑菌效果最好的提取工藝，蒲公英最佳提取工藝是料液比為1∶15，煎煮時(shí)間為30min，煎煮次數(shù)為3次，提取的綠原酸含量為5.833mg·mL-1。蒲公英水提物對(duì)豬鏈球菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小抑菌濃度(MBC)分別為62.5 mg·mL-1和250mg·mL-1。綠原酸對(duì)豬鏈球菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)分別為和2.5mg·mL-1和10mg·mL-1。掃描電鏡觀察可見(jiàn)陰性對(duì)照組細(xì)菌鑲嵌于生