磷霉素對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌生物被膜干預(yù)作用的體外研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進(jìn)行闡述：
　　第一部分 鮑曼不動(dòng)桿菌生物被膜體外模型的建立和分析
　　目的：建立鮑曼不動(dòng)桿菌(Acinetobacter baumannii，Ab)的體外生物膜(biofilm，BF)模型，觀察和定量分析鮑曼不動(dòng)桿菌BF形成的動(dòng)態(tài)過(guò)程。
　　方法：采用生物膜定性陽(yáng)性的臨床分離的Ab菌株（編號(hào)2814）為實(shí)驗(yàn)菌株，以載玻片為載體，建立Ab體外靜止生物膜模型，分別于建模第4、12、24、48、72、9

2、6h，以結(jié)晶紫染色法定量載體表面BF的量，電子掃描顯微鏡(scanning electron microscope，SEM)觀察載體表面BF的形態(tài)及結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果：Ab臨床菌株能夠在玻片載體上形成BF，建模12h、24h、48h、72h、96h時(shí)，載體表面BF結(jié)晶紫定量結(jié)果分別是0.16±0.04、0.61±0.09、1.58±0.92、2.09±0.17和1.46±0.49;而SEM可見(jiàn)24h時(shí)載體表面Ab成團(tuán)聚集，菌體外可見(jiàn)

3、少量黏液樣物質(zhì)包裹，細(xì)菌輪廓依稀可見(jiàn)。72h時(shí)載體表面黏液樣物質(zhì)稠密，呈立體樣結(jié)構(gòu)，不見(jiàn)細(xì)菌輪廓。
　　結(jié)論：鮑曼不動(dòng)桿菌可在無(wú)生命的玻片載體上形成BF，BF的形成是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過(guò)程。24h形成早期BF，72h形成成熟BF。
　　第二部分 磷霉素對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌生物被膜形成的抑制作用
　　目的：觀察磷霉素抑制鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)載體表面黏附作用及其對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌生物被膜形成的抑制作用。
　　方法：采用微量肉湯稀釋法分別測(cè)定

4、磷霉素(FOS)和紅霉素(EM)對(duì)Ab的最低抑菌濃度(MIC)。建立Ab生物被膜體外模型，分為空白對(duì)照組、FOS組、EM組，于開(kāi)始建模時(shí)就加入FOS(1/2MIC)和EM(1/4MIC)。第一組于建模24小時(shí)后，SEM聯(lián)合連續(xù)稀釋法活菌計(jì)數(shù)來(lái)檢測(cè)載體表面Ab黏附量;另一組于建模第三天，采用結(jié)晶紫染色法定量載體表面BF的量、SEM觀察載體表面BF的形態(tài)、連續(xù)稀釋法檢測(cè)載體表面BF內(nèi)活菌數(shù)。
　　結(jié)果：FOS、EM對(duì)Ab的MIC分別是

5、128μ g/ml、256μ g/ml。各組載體表面Ab的黏附量:電鏡下觀察:空白對(duì)照組可見(jiàn)Ab相互聚集，并被薄層黏液樣物質(zhì)包裹，而FOS組及EM組僅見(jiàn)少量散在游離的Ab;載體表面的活菌計(jì)數(shù)結(jié)果顯示:FOS組與EM組均少于空白對(duì)照組(P＜0.01)，且FOS組少于EM組(P＜0.05)。建模3天后，SEM觀察:空白對(duì)照組可見(jiàn)濃厚的黏液樣物質(zhì)，而FOS組及EM組僅見(jiàn)稀薄的黏液樣物質(zhì);結(jié)晶紫染色法半定量BF: FOS組及EM組均少于空白對(duì)照

6、組(P＜0.01)，且FOS組少于EM組(P＜0.01);BF內(nèi)活菌計(jì)數(shù):FOS組與EM組均少于空白對(duì)照組（P＜0.01），且FOS組少于EM組(P＜0.01)。
　　結(jié)論：FOS可以抑制Ab對(duì)載體的黏附，進(jìn)而抑制其BF的形成及成熟，且其抑制作用強(qiáng)于EM。
　　第三部分 磷霉素對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌生物被膜的破壞作用及其與左氧氟沙星的協(xié)同殺菌作用
　　目的：觀察磷霉素與左氧氟沙星聯(lián)合應(yīng)用對(duì)30株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌（MD R-

7、Ab）的體外抗菌活性，同時(shí)探討磷霉素對(duì)Ab生物被膜的破壞作用及其與左氧氟沙星聯(lián)合對(duì)BF內(nèi)Ab的殺菌作用。
　　方法：(1)采用棋盤(pán)法分別測(cè)定不同濃度組合的抗菌藥物對(duì)30株MDR-Ab的最低抑菌濃度，并計(jì)算出部分抑菌濃度指數(shù)(FICI)，判定聯(lián)合效應(yīng)。(2)測(cè)定左氧氟沙星(LFX)對(duì)Ab（編號(hào)2814）的MIC。(3)建立Ab體外生物被膜模型，分為空白對(duì)照組、磷霉素組、紅霉素組、左氧氟沙星組、磷霉素+左氧氟沙星組、紅霉素+左氧氟沙星

8、組。于建模第三天分別加入上述對(duì)應(yīng)的抗生素及組合，各組分別于抗生素作用0小時(shí)、4小時(shí)、8小時(shí)、24小時(shí)后，采用結(jié)晶紫染色法定量載體表面BF的量、連續(xù)稀釋法進(jìn)行載體表面BF內(nèi)活菌計(jì)數(shù)，另外，各組載體均于24小時(shí)后于SEM下觀察載體表面BF的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果：(1) FICI≤0.5占57.5％;0.5＜FICI≤1占40.6％;1＜FICI≤2占1.9％; FICI＞2占O％。(2)左氧氟沙星對(duì)Ab的MIC是16μ g/ml。(3

9、) Ab成熟BF經(jīng)抗生素及其組合作用24小時(shí)后，SEM觀察發(fā)現(xiàn)，磷霉素組與紅霉素組載體表面黏液樣物質(zhì)與空白對(duì)照組比較，BF結(jié)構(gòu)破壞明顯，且磷霉素組明顯于紅霉素組。左氧氟沙星組載體表面BF結(jié)構(gòu)與空白對(duì)照組比較，變化不大。磷霉素+左氧氟沙星組與紅霉素+左氧氟沙星組載體表面粘液樣物質(zhì)較空白對(duì)照組明顯減少。各組間載體表面BF的量的變化:左氧氟沙星組與空白對(duì)照組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);磷霉素組和紅霉素組與空白對(duì)照組比較

10、，第24小時(shí)總體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），吸光度值:磷霉素組＜紅霉素組＜空白對(duì)照組;磷霉素+左氧氟沙星組和紅霉素+左氧氟沙星組與空白對(duì)照組比較，從第8小時(shí)開(kāi)始，總體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，吸光度值:磷霉素+左氧氟沙星組＜紅霉素+左氧氟沙星組＜空白對(duì)照組。載體表面BF內(nèi)活菌計(jì)數(shù):磷霉素組、紅霉素組與空白對(duì)照組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;左氧氟沙星組與空白對(duì)照組比較，第24小時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）