內(nèi)皮細胞特異性分泌分子EGF-like domain 7（EGFL7）的初步研究.pdf

1、背景和目的： 本研究利用免疫組織化學染色技術，檢測人髂動脈AS斑塊內(nèi)一些參與血管生成的細胞因子如血小板衍生生長因子(PDGF)、內(nèi)皮細胞生長因子(vEGF)及血管細胞粘附分子(VCAM)、細胞間粘附分子(ICAM)的表達，旨在證實斑塊內(nèi)血管生成對AS發(fā)生發(fā)展的影響，尤其是EGFL7在AS斑塊內(nèi)的特異性表達，進一步證實EGFL7在病理性血管生成中的重要作用，為將來以egfl7為基因治療靶點，抑制AS斑塊內(nèi)新生血管形成，增加AS斑塊

2、的穩(wěn)定性提供理論基礎，從而為治療AS、腫瘤等病理性血管生成相關性疾病，提供新的治療思路和策略。 方法： 收集山東大學第二醫(yī)院2004年10月至2006年1月腎移植手術中切除、病理確診、資料完備的臨床病理診斷為動脈粥樣硬化斑塊形成的髂內(nèi)動脈血管標本32例為病例組，其中男性20例，女性12例，年齡40-68歲，平均年齡50.19±7.17歲。同時收集腎臟供體的髂內(nèi)動脈標本30例設為對照組，其中男性26例，女性4例，年齡20-

3、47歲，平均年齡33.13±8.59歲。10％中性福爾馬林固定，石蠟包埋，連續(xù)切片。利用免疫組織化學染色技術檢測正常血管及髂動脈粥樣硬化斑塊形成標本內(nèi)一些血管生成因子如VEGF、PDGF-AA、PDGF-BB及粘附分子ICAM-1及VCAM-1的蛋白表達水平變化，利用己知的相應抗體的陽性切片作為陽性對照，以PBS代替一抗體作為陰性對照。在細胞胞漿內(nèi)呈棕黃色顆粒，界限清楚，無明顯背景著色者為陽性表達。每張切片由兩名實驗操作人員雙盲雙測1

4、0個高倍視野內(nèi)的表達情況，判斷標準以“-、+”表示。結(jié)果采用x<'2>檢驗進行統(tǒng)計學分析。 結(jié)果： 1．對照組正常血管壁免疫組化染色顯示： 血管壁各層細胞胞漿內(nèi)未見EGFL7、VEGF、PDGF-AA、PDGF-BB棕黃色顆粒。在30例正常血管標本中，其中6例(20％)EC胞漿內(nèi)可見稀疏、淺淡的ICAM-1陽性顆粒，5例(16.7％)EC胞漿內(nèi)可見少量、淺淡的VCAM-1陽性顆粒。 2．實驗組AS標本免疫

5、組化染色結(jié)果顯示： (1)29例AS標本內(nèi)(90.6％)新生血管的EC胞漿內(nèi)可見EGFL7蛋白表達棕黃色顆粒，AS斑塊內(nèi)膜面的EC胞漿內(nèi)未見EGFL7蛋白表達陽性信號。 (2)30例AS標本內(nèi)(93.8％)的新生血管EC胞漿內(nèi)可見VEGF蛋白表達棕黃色顆粒。 (3)32例AS標本內(nèi)的新生血管EC胞漿內(nèi)未見PDGF-AA蛋白表達棕黃色顆粒，26例標本內(nèi)(81.3％)中層泡沫細胞胞漿內(nèi)可見PDGF-AA蛋白表達棕黃色

6、顆粒；32例AS標本內(nèi)新生血管區(qū)EC胞漿內(nèi)未見PDGF-BB表達棕黃色顆粒，中層泡沫細胞胞漿內(nèi)亦未見PDGF-BB蛋白表達棕黃色顆粒。 (4)31例AS標本內(nèi)(96.8％)可見工CAM-1表達陽性顆粒，主要分布于新生血管EC胞漿內(nèi)，中層亦可見陽性表達信號。30例AS標本內(nèi)(93.75％)可VCAM-1表達陽性顆粒，主要分布于新生血管EC胞漿內(nèi)，中層亦可見陽性表達信號。 3．統(tǒng)計學分析結(jié)果顯示： (1)動脈粥樣硬化

7、組與正常血管組相比，EGFL7表達陽性率明顯提高，差異具有顯著性(x<'2>=51.08，P<0.0001)(見表1)。 (2)動脈粥樣硬化組與正常血管組相比，VEGF表達陽性率明顯提高，差異具有顯著性(x<'2>=54.49，P<0.0001)(見表2)。 (3)動脈粥樣硬化組與正常血管組相比，PDGF-AA表達陽性率明顯提高，差異具有顯著性(x<'2>=41.98，P<0.0001)(見表3)。 (4)動脈粥

8、樣硬化組與正常血管組相比，ICAM表達陽性率明顯提高，差異具有顯著性(x<'2>=38.03，P<0.0001)(見表4)。 (5)動脈粥樣硬化組與正常血管組相比，VCAM表達陽性率明顯提高，差異具有顯著性(x<'2>=37.42，P<0.0001)(見表5)。 結(jié)論： 1．正常血管VEGF、PDGF-AA、PDGF-BB不表達，正常血管EC亦不表達EGFL7蛋白，正常血管壁可有弱的：ICAM-1及VCAM-1表

9、達。 2．AS斑塊內(nèi)vEGF、ICAM-1及VCAM-1表達明顯增高，與斑塊內(nèi)新生血管形成有關。 3．AS斑塊內(nèi)PDGF-AA表達水平提高，主要分布于血管壁中層的泡沫細胞，這是因為PDGF-AA主要由分泌型SMC產(chǎn)生，其表達增加主要參與調(diào)節(jié)SMC的增殖、遷移等，不參與斑塊內(nèi)血管生成。AS斑塊內(nèi)PDGF-BB表達水平無明顯改變，這是因為PDGF-BB主要由EC產(chǎn)生，PDGF-BB參與血管生成，但主要調(diào)節(jié)壁細胞募集和增殖，而