抗人內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子-1單克隆抗體的制備及其特性鑒定和初步應(yīng)用.pdf

1、目的研制抗人內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子-1(Endothelial cell specific molecule-1,ESM-1)單克隆抗體,并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定;探討ESM-1蛋白在腫瘤標(biāo)本中的表達(dá).方法采用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù),以人ESM-1蛋白為抗原,免疫BALB/C小鼠,取脾細(xì)胞與SP2/0,經(jīng)PEG融合,在HAT選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)兩周,用ELISA方法鑒定陽(yáng)性克隆、有限稀釋法篩選單克隆細(xì)胞株,并對(duì)其進(jìn)行特性分析:分析染色體核型;用S

2、igma公司的鼠單抗定型Immunotype<'TM>試劑盒進(jìn)行亞型分析;用Westen blot方法檢測(cè)單克隆抗體的特異性;用間接ELISA方法,測(cè)定了相對(duì)親和常數(shù);并通過(guò)免疫熒光鑒定ESM-1在內(nèi)皮細(xì)胞ECV304中的表達(dá).用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腎癌組織中ESM-1的變化,同時(shí)用HE染色觀(guān)察細(xì)胞結(jié)構(gòu).結(jié)果獲得了7株穩(wěn)定分泌抗人ESM-1的雜交瘤細(xì)胞株,其中3A7細(xì)胞株特異性尤為顯著,效價(jià)高達(dá)1:6000.其染色體數(shù)目為100條左右,所

3、分泌抗體亞型為IgG2b,親和常數(shù)為1.67×10<'4>L/mol,對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞中的ESM-1蛋白及細(xì)胞培養(yǎng)上清中的ESM-1均具有特異性識(shí)別,顯示高度特異性.并觀(guān)察到ESM-1主要分布在內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞胞漿內(nèi).在腎組織中,ESM-1定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞,且腎癌標(biāo)本中ESM-1陽(yáng)性表達(dá)顯著高于正常腎組織.結(jié)論成功地研制了抗人ESM-1的單克隆抗體細(xì)胞株,免疫組化結(jié)果表明所獲單抗具有一定的特異性和實(shí)用性.抗體可用于人的正常組織和腫瘤組織的免疫