糞腸球菌心內(nèi)膜炎抗原EfaA在大鼠心內(nèi)膜炎中的作用.pdf

1、目的：
　　探討糞腸球菌心內(nèi)膜炎抗原（EfaA)在大鼠感染性心內(nèi)膜炎中的作用，為臨床上預(yù)防和治療糞腸球菌感染性心內(nèi)膜炎的后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1、心內(nèi)膜炎大鼠模型的建立及評價
　　右側(cè)頸動脈導(dǎo)管插入術(shù)建立糞腸球菌心內(nèi)膜炎大鼠模型。將PE-50導(dǎo)管從大鼠右側(cè)頸動脈插入，皮下固定，24小時后，經(jīng)大鼠尾靜脈注射0.5ml過夜培養(yǎng)的糞腸球菌菌液（1×108CFU/ml），72小時后腹腔麻醉處死大鼠。解剖大鼠

2、剝離心臟，取出主動脈瓣瓣膜贅生物，稱取贅生物濕重，計數(shù)贅生物分離培養(yǎng)菌落數(shù)（CFU/g），主動脈瓣病理組織HE染色觀察，綜合評價心內(nèi)膜炎大鼠模型是否建立成功。
　　2、糞腸球菌efaA-野生株和efaA+轉(zhuǎn)化株引起大鼠心內(nèi)膜炎的比較
　　對大鼠進(jìn)行分組，導(dǎo)管插入成功后24小時，經(jīng)大鼠尾靜脈分別注射0.5ml過夜培養(yǎng)的糞腸球菌efaA-野生株、糞腸球菌efaA+轉(zhuǎn)化株和糞腸球菌efaA-空白轉(zhuǎn)化對照株菌液，菌密度均為1×108

3、CFU/ml。72小時后腹腔麻醉處死大鼠，解剖大鼠剝離心臟，取出主動脈瓣瓣膜贅生物，比較3組大鼠的贅生物濕重、瓣膜贅生物研磨勻漿后細(xì)菌計數(shù)（CFU/g）及主動脈瓣病理組織HE染色情況。
　　3、糞腸球菌efaA-野生株和efaA+轉(zhuǎn)化株引起大鼠心內(nèi)膜炎的死亡率比較
　　對大鼠進(jìn)行分組，導(dǎo)管插入成功后24小時，經(jīng)大鼠尾靜脈分別注射0.5ml過夜培養(yǎng)的糞腸球菌efaA-野生株、糞腸球菌efaA+轉(zhuǎn)化株和糞腸球菌efaA-空白轉(zhuǎn)化

4、對照株菌液，菌密度均為1×108CFU/ml。3天后觀察大鼠每天死亡數(shù)。
　　4、糞腸球菌efaA-空白對照株和efaA+轉(zhuǎn)化株引起大鼠心內(nèi)膜炎的贅生物的藥物敏感性比較K-B紙片擴(kuò)散法檢測糞腸球菌efaA+轉(zhuǎn)化株對常見抗生素的藥物敏感性；根據(jù)抑菌圈直徑大小選擇糞腸球菌efaA+轉(zhuǎn)化株較為敏感的抗生素—青霉素，測其MBC值；分別取efaA+轉(zhuǎn)化株、efaA-空白對照株菌液感染的心臟瓣膜贅生物，每組分別于青霉素溶液（濃度為160μg/

5、ml）中和生理鹽水中浸泡24小時，分別研磨勻漿細(xì)菌計數(shù)。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠心臟瓣膜可見贅生物形成，贅生物平均重量為15.3 mg，贅生物勻漿后分離培養(yǎng)，平均菌落計數(shù)為6.79×1010CFU/g，心臟瓣膜病理組織HE染色觀察可見主動脈瓣膜上有大量炎性細(xì)胞浸潤，并見大量由血小板、纖維素、壞死組織、炎癥細(xì)胞、大量細(xì)菌及肉芽組織所構(gòu)成的贅生物附著在動脈瓣膜組織上。成功建立心內(nèi)膜炎大鼠模型。
　　2.糞腸球菌efaA-

6、野生株和efaA+轉(zhuǎn)化株引起大鼠心內(nèi)膜炎的比較結(jié)果如下：efaA+轉(zhuǎn)化株組，贅生物濕重平均值為15.33mg，細(xì)菌計數(shù)為6.79×1010CFU/g；野生株組贅生物濕重平均值為7.27mg，細(xì)菌計數(shù)為3.40×1010CFU/g；空白對照組贅生物濕重平均值為8.51mg，細(xì)菌計數(shù)為3.32×1010CFU/g。
　　①轉(zhuǎn)化株組與野生株組比較贅生物濕重值更高（P<0.05），細(xì)菌計數(shù)更高（P<0.05），主動脈瓣炎癥細(xì)胞浸潤更多，炎

7、癥更加明顯；
　?、谝吧杲M與空白對照組比較贅生物濕重值、細(xì)菌計數(shù)以及主動脈瓣炎癥情況均差異不大（P>0.05）。
　　3.空白對照組與野生株組注射菌液7天死亡率分別為30％和40%，而轉(zhuǎn)化株組7天死亡率為70%，其余大鼠1周后處死解剖均可見不同程度的心內(nèi)膜炎。
　　4.糞腸球菌efaA-空白對照株和efaA+轉(zhuǎn)化株引起大鼠心內(nèi)膜炎的贅生物的藥物敏感性比較結(jié)果如下：轉(zhuǎn)化株組贅生物用青霉素溶液處理和生理鹽水處理活細(xì)菌數(shù)均

8、值分別為5.759×1010CFU/g、6.204×1010CFU/g，比值為0.928；空白對照組贅生物用青霉素溶液處理和生理鹽水處理活細(xì)菌數(shù)均值分別為1.058×1010CFU/g、2.754×1010CFU/g，比值為0.384。
　　結(jié)論：
　　1.成功構(gòu)建心內(nèi)膜炎大鼠模型；
　　2.糞腸球菌EfaA蛋白有利于大鼠感染性心內(nèi)膜炎的發(fā)生發(fā)展。
　　3.糞腸球菌efaA+轉(zhuǎn)化株在心內(nèi)膜炎中所形成的生物膜更為致