Elongator復合物在60Coγ射線誘導的肝癌細胞DNA損傷修復中的作用.pdf

1、蘇州大學學位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學位論文是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得蘇州大學或其它教育機構(gòu)的學位證書而使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人承擔本聲明的法律責任。論文作者簽名： 生! 塞! 嫠 日 期：翌鑒生f 2 ：E 1 0 n g a t o r 復合物在6

2、 0 c o ^ r 射線誘導的肝癌細胞D N A 損傷修復中的作用 中文摘要中文摘要目的：研究E 1 0 n g a t o r 復合物對6 0 C o7 射線輻照誘導的肝癌細胞D N A 損傷修復的影響，探討在肝癌發(fā)生和發(fā)展過程中E 1 0 n g a t o r 對肝癌細胞基因組發(fā)揮保護作用的分子機制。方法：1 ．R T ．P C R 檢測腫瘤細胞中內(nèi)源性e l p 3 和e l p 4m R N A 的表達量。2 ．以0 T M

3、 值為指標，用彗星電泳檢測輻照后各組細胞的D N A 損傷程度。3 ．以Y —H 2 A X 為指標，用免疫熒光法和w e s t e m b l o t 進一步確認輻照后各組細胞在不同時間點的D N A 損傷程度和蛋白表達變化情況。4 ．流式細胞儀檢測輻照后各組細胞的凋亡率。5 ．實時熒光定量P C R 檢測各組細胞中R A D 5 0 、M r e l l 、N b s l 、A T M 、A T R 、D N A P K ．c s

4、 、C h k l 、C h k 2 、X R C C 6 、B R C A l 、G A D D 4 5 G 和C D C 2 5 A 等損傷修復相關(guān)基因的表達水平。6 ．W e s t e m b l o t 檢測各組細胞中R A D 5 0 、M r e l l 和X R C C 6 等損傷修復相關(guān)蛋白的表達水平。結(jié)果：1 ．R T - P C R 檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，內(nèi)源性e l p 3 和e l p 4m I ⅢA 在不同腫瘤細胞株

5、中均有表達，但相對表達量并沒有顯著變化。2 ．彗星電泳檢測結(jié)果顯示，與對照組H 印G 2 ／S K —H 印．1 細胞組相比較，E l o n g a t o r 過表達組中O T M 值明顯減小，而E 1 0 n g a t o r 干擾組中0 T M 值明顯增加，從而說明E 1 0 n g a t o r 復合物能夠減輕肝癌細胞D N A 損傷程度，對保護細胞D N A 免受6 0 C oY 射線輻照造成的損傷是非常關(guān)鍵的。3 ．免