利拉魯肽對AD樣神經(jīng)退行性變的保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的:
　　研究GLP-1類似物利拉魯肽對H2O2誘導(dǎo)的神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞的AD樣神經(jīng)退行性變的保護(hù)作用。
　　方法:
　　本研究以人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞作為研究對象，分為四組分別給予不同的藥物處理即對照組(Con)、氧化損傷組(H2O2處理24小時)、治療組（利拉魯肽Lira預(yù)處理組）、PI3K抑制劑Wortmannin(Wt)阻斷組（應(yīng)用利拉魯肽前給予1uM Wortmannin預(yù)處理1小時）

2、。后三組細(xì)胞需要加入H2O2誘導(dǎo)神經(jīng)元氧化損傷模型，而治療組在給予H2O2損傷前進(jìn)行利拉魯肽預(yù)處理4小時。MTT實(shí)驗(yàn)檢測各組SH-SY5Y細(xì)胞活性、LDH實(shí)驗(yàn)檢測各組SH-SY5Y細(xì)胞毒性、脂質(zhì)氧化MDA檢測細(xì)胞氧化應(yīng)激水平、annexin-Ⅴ/PI雙染后流式細(xì)胞儀分析不同處理組細(xì)胞凋亡百分比、免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測各組SH-SY5Y細(xì)胞微管相關(guān)蛋白Tau和神經(jīng)絲蛋白(NFs)的磷酸化水平、Bcl-2家族成員凋亡相關(guān)蛋白Bax和存活相關(guān)蛋白B

3、cl-2的表達(dá)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶caspase-3的表達(dá)以及PI3K-AKt信號通路中關(guān)鍵的激酶PKB/Akt和GSK-3β的磷酸化水平。
　　結(jié)果:
　　與Con組相比，氧化損傷(H2O2)組SH-SY5Y細(xì)胞存活率顯著降低，乳酸脫氫酶(LDH)釋放率增高，細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA水平顯著增高，細(xì)胞凋亡百分比顯著增高，細(xì)胞內(nèi)Tau和NFs蛋白過度磷酸化，Bax水平明顯增高，Bcl-2水平顯著下降，活化的c

4、aspase-3增多，PKB/Akt和GSK-3β的磷酸化水平減弱;利拉魯肽干預(yù)治療(Lira)組與氧化損傷(H2O2)組相比，細(xì)胞存活率顯著增高，乳酸脫氫酶釋放率降低，細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA水平明顯降低，細(xì)胞凋亡百分比顯著下降，細(xì)胞內(nèi)Tau和NFs蛋白的磷酸化水平減弱，Bax水平降低，Bcl-2顯著增多，活化的caspase-3減少以及PKB/Akt和GSK-3β的磷酸化水平顯著提升。而Wortmannin(Wt)阻斷組相比Lir

5、a治療組其細(xì)胞存活率顯著降低，細(xì)胞毒性增加，細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA水平增高，細(xì)胞凋亡百分比增高，胞內(nèi)Tau和NFs蛋白過度磷酸化，Bax的表達(dá)明顯增多，Bcl-2的表達(dá)減少，活化的caspase-3增多以及PKB/Akt和GSK-3β的磷酸化水平減弱。
　　結(jié)論:
　　利拉魯肽能夠?qū)笻2O2誘導(dǎo)的AD樣神經(jīng)退行性變，其機(jī)制可能通過激活PI3K-AKt信號傳導(dǎo)通路提高細(xì)胞的存活，抑制細(xì)胞凋亡，改善神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)Tau蛋白與N