鹽酸小檗堿對(duì)Jurkat細(xì)胞凋亡及Survivin基因表達(dá)的影響.pdf

1、急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)是源于單個(gè)B或T淋巴細(xì)胞前體細(xì)胞的惡性腫瘤。ALL好發(fā)于兒童及青少年，在兒童中預(yù)后較好，在成人中，使用標(biāo)準(zhǔn)化療方案往往可以實(shí)現(xiàn)首次緩解，但是復(fù)發(fā)率高達(dá)70-80％，傳統(tǒng)化療藥物對(duì)正常組織特別是造血系統(tǒng)的毒性作用限制了化療藥物的使用劑量，因此尋求高效低毒的治療手段成為目前研究的熱點(diǎn)。
　　小檗堿可以從中藥黃連、黃柏和三顆針等小檗屬植物中提取，現(xiàn)代研究表明小檗堿對(duì)多種實(shí)體腫瘤及血液系統(tǒng)腫瘤均表現(xiàn)出抗腫瘤活性

2、，其主要作用為誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，細(xì)胞周期阻滯，抑制腫瘤新生血管生成，而對(duì)正常組織副作用小。
　　本實(shí)驗(yàn)主要研究鹽酸小檗堿對(duì)人白血病Jurkat細(xì)胞細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期及Survivin基因表達(dá)是否存在影響。我們采用了改良MTT法測(cè)定Jurkat細(xì)胞的IC50及細(xì)胞毒作用，Hoechst33342熒光染色法觀察細(xì)胞核的變化，流式細(xì)胞術(shù)AnnexinV-FITC+PI法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，PI單染法檢測(cè)細(xì)胞周期，半定量RT-PCR法

3、檢測(cè)Survivin基因表達(dá)。結(jié)果顯示，在0-10μg/ml藥物濃度范圍，Jurkat細(xì)胞的生長(zhǎng)是明顯受抑制的，隨著鹽酸小檗堿濃度增大Jurkat細(xì)胞生長(zhǎng)率逐漸減低，說(shuō)明鹽酸小檗堿對(duì)Jurkat細(xì)胞的抑制作用呈濃度依賴(lài)性。鹽酸小檗堿24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)作用Jurkat細(xì)胞的IC50值分別為:6.94μg/ml、3.94μg/ml、2.45μg/ml，說(shuō)明鹽酸小檗堿對(duì)Jurkat細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用亦呈時(shí)間依賴(lài)性。0μg/ml及5μ

4、g/ml鹽酸小檗堿作用于Jurkat細(xì)胞48小時(shí)后，通過(guò)Hoechst染色，Jurkat細(xì)胞細(xì)胞核出現(xiàn)凋亡改變:細(xì)胞核變形，核質(zhì)濃縮，并出現(xiàn)凋亡小體。AnnexinV-FITC+PI法檢測(cè)鹽酸小檗堿對(duì)Jurkat細(xì)胞凋亡后發(fā)現(xiàn)，0，0.1，0.5，1，5，10μg/ml鹽酸小檗堿處理Jurkat細(xì)胞48h后，早期凋亡細(xì)胞比例分別為:2.06％±0.51％，3.60％±1.05％，3.38％±1.37％，3.97％±1.53％，12.77