Gli-2在膀胱癌中的表達(dá)和意義及對T24細(xì)胞VEGF和MMP-9表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　通過檢測Hedgehog信號通路關(guān)鍵基因Gli-2蛋白在膀胱癌組織中的表達(dá)，研究其與膀胱癌臨床病理特征之間的關(guān)系；探討Gli-2在膀胱癌T24細(xì)胞增殖中的作用及其機(jī)制，以及對血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)蛋白表達(dá)的影響。
　　方法：
　　(1)應(yīng)用免疫組

2、織化學(xué)方法檢測77例膀胱癌組織中Gli-2的表達(dá)。(2)應(yīng)用小干擾RNA（siRNA）下調(diào)Gli-2在膀胱癌T24細(xì)胞系中的表達(dá)，分別提取總RNA和蛋白質(zhì)。使用RT-PCR方法檢測Gli-2的mRNA表達(dá)，Western-blot方法分析Gli-2，VEGF和MMP-9蛋白的表達(dá)。分別應(yīng)用CCK-8法和流式細(xì)胞術(shù)檢測下調(diào)Gli-2表達(dá)對細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期的影響。
　　結(jié)果：
　　(1)在77例膀胱癌中，77例均有不同程

3、度的Gli-2陽性表達(dá)，陽性率為100.0％。Gli-2的表達(dá)與病理分期密切相關(guān)，隨病理分期的升高，評分亦高（P＜0.001），且在肌層浸潤性膀胱癌中的表達(dá)明顯高于非肌層浸潤性膀胱癌（P＜0.001），Gli-2的表達(dá)與病理分級不相關(guān)，兩者僅有邊緣性意義（P=0.052）。(2)在T24細(xì)胞中應(yīng)用siRNA沉默Gli-2表達(dá)后，實驗組細(xì)胞的Gli-2基因的mRNA表達(dá)水平明顯下降，與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=-3.031，P＜0.

4、05）。Gli-2蛋白的表達(dá)明顯下調(diào)。此外，VEGF和MMP-9蛋白的表達(dá)較對照組均降低。CCK-8法檢測結(jié)果顯示實驗組細(xì)胞增殖被顯著抑制，其P值均＜0.001。流式細(xì)胞儀檢測RNA干擾后48h的細(xì)胞周期情況，發(fā)現(xiàn)實驗組有（27.8±2.1）%的細(xì)胞被阻滯于G2/M期，而對照組G2/M期細(xì)胞只有（6.61±1.1）%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。Gli-2基因表達(dá)被沉默后，T24細(xì)胞細(xì)胞凋亡率為（11.63±1.09）%，較對照組