中國漢族人群Y染色體微缺失及部分缺失與男性不育的相關(guān)性研究.pdf

1、已婚育齡男性中不育癥的發(fā)病率高達(dá)10％～15％。男性不育主要表現(xiàn)為精子的數(shù)量減少、形態(tài)和動力的異常。大約50～60％男性不育患者的病因是明確的，例如：精索靜脈曲張，輸精管阻塞，隱睪等。排除以上因素的不育為原發(fā)不育。自Tiepolo等發(fā)現(xiàn)“無精子癥因子”以來，Y染色體微缺失被認(rèn)為是原發(fā)性男性不育的重要原因，并成為男性不育研究的熱點(diǎn)。“無精子癥因子”分布于Y染色體長臂的三個(gè)不同區(qū)域，被稱為AZFa，AZFb和AZFc。經(jīng)過全球范圍內(nèi)的研究發(fā)

2、現(xiàn)，大概有10％的無精和少精患者存在這種缺失。其中，大約80％表現(xiàn)為AZFc缺失。另外，SZFc的睪丸表型多種多樣，患者的精子密度的波動范圍也很大。這些微缺失雖然不會引起受精和胚胎發(fā)育的異常，卻使男性子代繼承了不育的風(fēng)險(xiǎn)性。除此之外，最近研究發(fā)現(xiàn)AZFc區(qū)部分缺失，例如b2/b3，gr/gr等同樣有這種危害。本課題采用病例對照研究設(shè)計(jì)，開展了以醫(yī)院為基礎(chǔ)的男性不育分子流行病學(xué)研究，重點(diǎn)研究中國漢族人群Y染色體微缺失及部分缺失同男性不育的

3、相關(guān)性。 第一部分：Y染色體微缺失及AZFc區(qū)部分缺失與男性不育關(guān)聯(lián)的分子流行病學(xué)研究 本研究通過較大樣本量的病例對照研究(164名原發(fā)無精病人，78名原發(fā)少精病人，209名不明原因的不育患者和248名對照)，對中國漢族人群中Y染色體微缺失的發(fā)生情況進(jìn)行評價(jià)，以及對AZFc區(qū)部分缺失與男性不育之間關(guān)系進(jìn)行探討。 通過應(yīng)用多重PCR技術(shù)，分析Y染色體上特定的序列標(biāo)記位點(diǎn)(sequence tagged site，S

4、TS)，確定Y染色體微缺失和AZFc區(qū)部分缺失的類型。結(jié)果如下： 1．在242例生精障礙患者中(包括原發(fā)無精和少精病人)，共發(fā)現(xiàn)24例Y染色體微缺失患者，缺失率為9.9％；在隨機(jī)抽取的50名不明原因不育患者和50名對照中，未發(fā)現(xiàn)Y染色體微缺失患者。24名微缺失患者的缺失類型為：5例AZFa缺失，1例AZFb易缺失，12例AZFc缺失，2例AZFbc缺失(AZFb+AZFc缺失)和4例AZFabc缺失(AZFa+AZFb+AZFc

5、缺失)。其中4例AZFc缺失患者為原發(fā)少精病例，其他全為原發(fā)無精病例。 2．通過多重PCR，分析所有研究對象AZFc區(qū)三種部分缺失(gr/gr，b2/b3和b1/b3)的缺失情況。在排除Y染色體微缺失的生精障礙患者中(242-24=218例)共發(fā)現(xiàn)35例(16.1％)部分缺失患者，包括15例(6.5％)gr/gr缺失、20例(8.7％)b2/b3缺失和0例b1/b3缺失；在209例不明原因不育患者中共發(fā)現(xiàn)33例(15.8％)部分

6、缺失患者，包括15例(7.2％)gr/gr缺失、18例(8.6％)b2/b3缺失和0例b1/b3缺失；在248例對照中共發(fā)現(xiàn)27例(10.9％)部分缺失患者，包括19例(7.7％)gr/gr缺失、8例(3.2％)b2/b3缺失和0例b1/b3缺失。其中，b2/b3缺失在不育和生育人群中的發(fā)生率差異具有顯著性(OR=2.93；95％CI 1.34-6.39)；gr/gr與b1/b3缺失未發(fā)現(xiàn)這種差異。 上述結(jié)果表明，b2/b3缺失

7、可以增加男性不育發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)(OR=2.93；95％CI 1.34-6.39)。 第二部分：AZFc區(qū)部分缺失人群相關(guān)基因拷貝缺失與男性不育關(guān)系的研究 本研究通過分析AZFc區(qū)部分缺失患者(包括gr/gr和b2/b3缺失患者)精子生成相關(guān)的DAZ基因和CDY1基因拷貝缺失情況，對不同的基因拷貝缺失類型同原發(fā)性精子生成障礙之間的相關(guān)性進(jìn)行探討。 通過應(yīng)用RFLP(restriction fragment length

8、 polymorphism)，分析Y染色體上特定的SFV(sequence family variant)，確定DAZ基因和CDY1基因拷貝缺失的具體類型。在gr/gr和b2/b3缺失患者中均發(fā)現(xiàn)了四種基因拷貝缺失類型：DAZ1/2+CDY1a，DAZ1/2+CDY1b，DAZ3/4+CDY1a,和DAZ3/4+CDY1b。具體結(jié)果如下： 1.49例gr/gr缺失患者的基因拷貝類型為：10例DAZ1/2+CDY1a，21例DAZ

9、1/2+CDY1b，16例DAZ3/4+CDY1a幫2例DAZ3/4+CDY1b。各種類型在生精障礙組，不明原因不育組以及正常對照組中的發(fā)生率相近，未發(fā)現(xiàn)顯著性差異。 2.46例b2/b3缺失患者的基因拷貝類型為：2例DAZ1/2+CDY1a，1例DAZ1/2+CDY1b，35例DAZ3/4+CDY1a和8例DAZ3/4+CDY1b。其中，在DAZ3/4+CDY1a患者中，包括16例(7.3％)生精障礙患者，13例(6.2％)不

10、明原因不育患者以及6例(2.4％)正常對照；在DAZ3/4+CDY1b患者中，包括4例(1.83％)生精障礙患者，4例(1.91％)不明原因不育患者以及0例(0％)正常對照。統(tǒng)計(jì)分析顯示b2/b3缺失患者中DAZ3/4+CDY1a型在不育和生育人群中的發(fā)生率差異具有顯著性(OR=2.78，95％CI 1.13-6.78)。 3.綜合分析95例部分缺失患者，其基因拷貝缺失類型為：12侈D(zhuǎn)AZ1/2+CDy1a，22例DAZ1/2