兔急性心肌缺血再灌注損傷模型中血漿ET、CGRP、NO、SOD、MDA變化的研究.pdf

1、目的：隨著溶栓療法、經(jīng)皮腔內(nèi)冠脈血管成形術(shù)、冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù)等多種血運(yùn)重建方法的建立和推廣，缺血心肌重新獲得血液供應(yīng)，明顯減輕了細(xì)胞損傷，提高了臨床療效。但隨之而來(lái)的缺血再灌注損傷成為醫(yī)學(xué)界的一個(gè)難題，研究其發(fā)生機(jī)制成為熱點(diǎn)之一。本課題以急性心肌缺血再灌注兔模型為研究對(duì)象，觀察了各組不同時(shí)間點(diǎn)血漿中內(nèi)皮素(Endothelin，ET)、降鈣素基因相關(guān)肽(Calcitoningene-related petide，CGRP)、一氧化氮(Ni

2、trogen monoxidum，NO)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(Malondialdehyde，MDA)的變化，來(lái)探討其在心肌缺血再灌注損傷中的機(jī)制及相互間的作用，為臨床治療提供理論基礎(chǔ)；同時(shí)利用ABS樹(shù)脂和丙酮以合適的比例配成鑄型劑，行冠脈鑄型，從而為臨床或基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的形態(tài)學(xué)研究探尋一種方法。 方法：由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供的7-9周齡兔70只，體重均為2.0kg左右，雌雄

3、各半。隨機(jī)分為A(n=20)、B(n=25)、C(n=25)三組，每組開(kāi)胸后持小圓針于前降支起始后0.5cm處穿線環(huán)繞冠狀動(dòng)脈，其中A組僅放線但不阻斷冠脈，開(kāi)胸六小時(shí)后關(guān)胸，即偽手術(shù)組；B組開(kāi)胸阻斷冠脈6小時(shí)后血管再通行再灌注，后關(guān)胸，即再灌注組；C組開(kāi)胸后永久結(jié)扎冠脈，六小時(shí)后關(guān)胸，即梗死組。開(kāi)胸后均給予肝素鈉1mg·kg-1，以防止阻斷后冠脈內(nèi)形成血栓。各組均于開(kāi)胸前(T1)、關(guān)胸后12小時(shí)(T2)、24小時(shí)(T3)、48小時(shí)(T4

4、)、72小時(shí)(T5)等五個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別取靜脈血5ml注入含7.5％EDTA二鈉75μl和抑肽酶100μl的試管中，混勻，4℃3000rpm，離心10分鐘，分離出血漿。-80℃冰箱中保存待測(cè)。將ABS樹(shù)脂和丙酮以1:20的比例(即1g樹(shù)脂配20ml丙酮)配制成鑄型劑，實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)處死兔子后，用注射器經(jīng)冠狀動(dòng)脈口注入鑄型劑行冠狀動(dòng)脈鑄型，然后將兔子心臟放于37％的鹽酸中腐化心肌，清水小心沖洗后，觀測(cè)血管再通情況。應(yīng)用北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司提

5、供的ET、CGRP試劑盒，放射免疫法測(cè)定各標(biāo)本血漿中的ET、CGRP的濃度；用南京建成生物工程研究所提供的NO、SOD、MDA試劑盒，比色法測(cè)定各標(biāo)本血漿中的NO、SOD、MDA的濃度或活力。各項(xiàng)數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。組內(nèi)及組間比較均用單因素方差分析，P＜0.05為差異具有顯著性。 結(jié)果：1 冠脈鑄型情況：總體成功率為97％，其中：A組均獲得滿意的前降支冠脈鑄型；B組有一只兔子的前降支未見(jiàn)中下段，可能為結(jié)扎線處血栓

6、形成，剔出研究對(duì)象，其余鑄型均獲得成功；C組一只兔子前降支中下段仍可見(jiàn)細(xì)的血管鑄型，說(shuō)明結(jié)扎冠脈后，僅僅造成血管狹窄，但并未完全梗死，故亦剔出研究對(duì)象，其余鑄型亦完全成功。2血漿中ET的濃度變化組內(nèi)比較：A組血漿中ET的濃度在五個(gè)時(shí)間點(diǎn)的變化無(wú)顯著性(P＞0.05)；B組在關(guān)胸后12小時(shí)(T2)、24小時(shí)(T3)、48小時(shí)(T4)、72小時(shí)(T5)均較術(shù)前(T1)顯著升高(P＜0.05)，但自T2后各時(shí)間點(diǎn)均較T2顯著下降(P＜0.05

7、)：C組關(guān)胸后各時(shí)間點(diǎn)均較術(shù)前(T1)顯著升高(P＜0.05)，且持續(xù)到關(guān)胸后72小時(shí)(T5)。組間比較：各組血漿ET水平在T1時(shí)間點(diǎn)無(wú)顯著區(qū)別；在T2、T3、T4、T5時(shí)間點(diǎn)B、C兩組均較A組顯著升高(P＜0.05)；在T2時(shí)間點(diǎn)B組較C組亦顯著升高(P＜0.05)，在T3時(shí)間點(diǎn)B、C兩組差別無(wú)顯著性(P＞0.05)，但在T4、T5時(shí)間點(diǎn)C組均較B組顯著升高(P＜0.05)。3血漿中CGRP的濃度變化組內(nèi)比較：A組血漿中CGRP的濃度

8、在五個(gè)時(shí)間點(diǎn)的變化無(wú)顯著性(P＞0.05)；B、C兩組在T2、T3、T4均較T1顯著降低(P＜0.05)，但T5較T1時(shí)間點(diǎn)降低無(wú)顯著性(P＞0.05)。組間比較：各組血漿CGRP水平在T1、T5時(shí)間點(diǎn)無(wú)顯著區(qū)別(P＞0.05)。在T2時(shí)間點(diǎn)B、C兩組均較A組顯著降低(P＜0.05)，且B組較C組亦顯著降低(P＜0.05)；在T3、T4時(shí)間點(diǎn)B、C兩組均較A組顯著降低(P＜0.05)，但B、C兩組差別不顯著(P＞0.05)。4血漿中NO

9、的濃度變化組內(nèi)比較：A組血漿中NO的濃度在五個(gè)時(shí)間點(diǎn)的變化無(wú)顯著性(P＞0.05)；B組在T2、T3、T4、T5均較T1顯著降低(P＜0.05)，且T3較T2顯著降低(P＜0.05)，但T3、T4、T5間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；C組在T2、T3、T4、T5時(shí)間點(diǎn)均較T1顯著降低(P＜0.05)，但T2、T3、T4、T5間差別無(wú)顯著性(P＞0.05)。組間比較：各組血漿NO水平在T1時(shí)間點(diǎn)無(wú)顯著區(qū)別(P＞0.05)；在T2、T3

10、、T4、T5時(shí)間點(diǎn)B、C兩組均較A組顯著降低(P＜0.05)；在T2時(shí)間點(diǎn)B、C兩組差別無(wú)顯著性(P＞0.05)，在T3、T4、T5時(shí)間點(diǎn)B組較C組顯著降低(P＜0.05)。5血漿中SOD的濃度組內(nèi)比較：A組血漿中SOD的濃度在五個(gè)時(shí)間點(diǎn)的變化無(wú)顯著性(P＞0.05)；B、C兩組在T2、T3、T4、T5均較T1顯著降低(P＜0.05)。組間比較：各組血漿SOD水平在T1時(shí)間點(diǎn)無(wú)顯著區(qū)別。在T2、T3、T4、T5時(shí)間點(diǎn)B、C兩組均較A組顯

11、著降低(P＜0.05)，且B組較C組亦顯著降低(P＜0.05)。 6 血漿中MDA的濃度變化組內(nèi)比較：A組血漿中MDA的濃度在五個(gè)時(shí)間點(diǎn)的變化無(wú)顯著性(P＞0.05)；B組T2、T3、T4、T5均較T1顯著升高(P＜0.05)，但T5較T4顯著降低(P＜0.05)；C組T2、T3、T4、T5均較T1顯著升高(P＜0.05)，但自T3時(shí)間點(diǎn)后下降，且T5較T4顯著降低(P＜0.05)。組間比較：各組血漿MDA水平在T1時(shí)間點(diǎn)無(wú)顯著區(qū)別。在

12、T2、T3、T4、T5時(shí)間點(diǎn)B、C兩組均較A組顯著升高(P＜0.05)，且B組較C組升高亦顯著(P＜0.05)。 結(jié)論：1 ABS樹(shù)脂與丙酮以合適的比例配成鑄型劑，可以作為小血管鑄型的理想材料，從而為相關(guān)的臨床或基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究提供形態(tài)學(xué)證據(jù)。2 通過(guò)對(duì)各組研究對(duì)象血漿中ET、CGRP、NO、MDA濃度及SOD活力的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)及比較，說(shuō)明其在缺血再灌注的早期共同參與了再灌注損傷過(guò)程，故在臨床上針對(duì)上述指標(biāo)的變化給予相應(yīng)的干預(yù)，可能會(huì)減

13、輕再灌注損傷。3 有研究表明內(nèi)皮素(ET)和降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)在缺血再灌注損傷過(guò)程中的作用相互拮抗。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示心肌缺血再灌注后的12小時(shí)，血漿中內(nèi)皮素急劇升高，而降鈣素基因相關(guān)肽下降，二者的變化趨勢(shì)相反，一定程度上與上述結(jié)論吻合。其原因可能是早期產(chǎn)生的各種因子及代謝產(chǎn)物對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生刺激作用，促使其合成釋放ET增加，同時(shí)消耗CGRP。4 一氧化氮(NO)和內(nèi)皮素(ET)是一對(duì)具有拮抗效應(yīng)的血管活性物質(zhì)，從本實(shí)驗(yàn)二者的變化趨