大鼠急性在體心肌缺血再灌注損傷模型建立及評(píng)估.pdf

1、隨著社會(huì)發(fā)展，我國(guó)已逐漸步進(jìn)入老齡化社會(huì)，心腦血管病已成為威脅人民健康的重大疾病之一。據(jù)聯(lián)合國(guó)預(yù)測(cè)，到2020年我國(guó)65歲以上老齡人口將達(dá)1.67億人，約占全世界老齡人口6.98億人的24％，全世界四個(gè)老年人中就有一個(gè)是中國(guó)老年人，心血管疾病將在我國(guó)大流行。為了應(yīng)對(duì)心血管疾病，心肌血運(yùn)重建技術(shù)已在臨床上廣泛應(yīng)用并蓬勃發(fā)展。由于溶栓療法、冠脈搭橋術(shù)、導(dǎo)管技術(shù)、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈血管成形術(shù)及心臟外科體外循環(huán)的建立和推廣，患者生存率已明顯提高。但臨

2、床工作者不得不面對(duì)一個(gè)難題，就是心肌缺血-再灌注損傷(miocardialischemia-reperfusion injury，MIRI)。MIRI越來越受到人們的關(guān)注，許多臨床工作者嘗試模擬心肌缺血再灌注損傷過程。但如何進(jìn)行有效的、符合臨床疾病特征且具有操作相對(duì)簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性高、重復(fù)性好的模擬，成為眾多專家學(xué)者研究的熱點(diǎn)。鑒于缺血再灌注損傷的臨床實(shí)驗(yàn)受到限制，本實(shí)驗(yàn)以阻斷大鼠LAD造成急性心肌缺血，并在預(yù)定時(shí)間內(nèi)恢復(fù)血流，模擬人缺血再

3、灌注過程，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室條件建立一種有效的、適合臨床研究的在體缺血再灌注模型，為以后研究缺血再灌注損傷機(jī)制及藥物在缺血再灌注損傷中起到的可能機(jī)制打下基礎(chǔ)。
　　 材料與方法：
　　 健康SD大鼠30只(SPF級(jí)，由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，體重(240±10)g，雌雄不限。30只大鼠隨機(jī)分為2組，每組15只。A組為假手術(shù)組（對(duì)照組），B組為缺血再灌注組（手術(shù)組）。實(shí)驗(yàn)時(shí)10％水合氯醛(0.32ml/100

4、g)腹腔注射麻醉大鼠，頸部及左胸備皮，并仰位固定于手術(shù)臺(tái)，頸胸部碘伏常規(guī)消毒。大鼠頸動(dòng)脈置管，以備取血補(bǔ)液及全身肝素化，后經(jīng)口插入適當(dāng)長(zhǎng)度的16G套管針作為氣管插管，氣管插管接小動(dòng)物呼吸機(jī)，連接多導(dǎo)生理記錄儀心電監(jiān)護(hù)，記錄各組各時(shí)間段通用導(dǎo)聯(lián)心電圖的波形變化，自左側(cè)3～4肋間開胸，打開心包暴露心臟，用鑷子掀開左心耳，自左心耳下方2～3mm入針，以prolene:6-0線在冠脈左前降支下縫過，縫扎的中點(diǎn)在左心耳和肺動(dòng)脈圓錐的交界和心尖連線

5、上，在肺動(dòng)脈圓錐旁出針，結(jié)扎時(shí)用一細(xì)硬膜外麻醉管墊子血管與結(jié)扎線之間，對(duì)照組只穿線不結(jié)扎冠脈，直接關(guān)胸，手術(shù)組缺血30min后抽出硬膜外麻醉管，剪斷結(jié)扎線使心肌再灌注，待心電圖恢復(fù)穩(wěn)定5min后關(guān)胸。術(shù)前經(jīng)頸動(dòng)脈注射肝素(150u/kg)一避免血栓形成，分別于術(shù)前30min及心肌缺血再灌注24h后取血，取血后3000轉(zhuǎn)/分，離心10分，取血清保存于-20度冰箱，后統(tǒng)一分裝，經(jīng)全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定肌酐激酶同工酶MB（Creatine Ki

6、nase-MB），乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后經(jīng)原切口開胸，經(jīng)升主動(dòng)脈根部迅速摘取大鼠心臟，應(yīng)用TTC心肌染色法計(jì)算心肌梗死范圍。采用SPSS17.0軟件包分析，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示(x±s)，兩組間行t檢驗(yàn)，以P＜0.05作為檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1、心電圖的變化
　　 假手術(shù)組（對(duì)照組）大鼠在正常開胸狀態(tài)下，僅偶爾出現(xiàn)室性早搏，手術(shù)組結(jié)扎后及再灌注時(shí)均見典型心電

7、圖(ECG)變化，表現(xiàn)為結(jié)扎冠狀動(dòng)脈后，心電圖表現(xiàn)為R波增高、變寬，伴ST段抬高，伴有心律失常（包括室性早搏及短陣室性心動(dòng)過速），再灌注后表現(xiàn)為增高的R波振幅回落，抬高的ST段下降，并伴有室早等心律失常，時(shí)間延長(zhǎng)，心律失常逐漸消失。
　　 2、心肌梗死范圍的影響
　　 對(duì)照組大鼠心肌TTC染色后，未見明顯心肌梗死;手術(shù)組大鼠心肌梗死范圍為30.8±4.55％。
　　 3、對(duì)血清肌酸激酶同工酶MB影響
　　

8、 手術(shù)組血清肌酸激酶同工酶MB較對(duì)照組在缺血前30分變化無差異;手術(shù)組再灌注24小時(shí)后血清肌酸激酶同工酶MB明顯高于對(duì)照組(P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4、對(duì)血清乳酸脫氫酶影響
　　 手術(shù)組血清乳酸脫氫酶較對(duì)照組在缺血前30分變化無差異;手術(shù)組再灌注24小時(shí)后血清乳酸脫氫酶明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1、本實(shí)驗(yàn)聯(lián)合心電圖改變，心肌標(biāo)記物（肌酸激酶同