2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩84頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、目的:1.建立多房棘球絳蟲分泌蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)。2.構(gòu)建棘球絳蟲蛋白芯片及篩選診斷抗原。3.制備及評(píng)價(jià)棘球絳蟲重組抗原。
  方法:1.建立多房棘球絳蟲分泌蛋白數(shù)據(jù)庫(kù):①通過(guò)檢索公開數(shù)據(jù)庫(kù),建立多房棘球絳蟲全基因組蛋白質(zhì)序列本地?cái)?shù)據(jù)庫(kù)。②利用生物信息學(xué)分析軟件預(yù)測(cè)多房棘球絳蟲分泌蛋白質(zhì)組。③利用Blast2GO和KAAS自動(dòng)注釋軟件對(duì)分泌蛋白進(jìn)行注釋與分析。2.構(gòu)建棘球絳蟲蛋白芯片及篩選診斷抗原:①采用博奧Personal Arraye

2、rTM16芯片點(diǎn)樣儀將棘球絳蟲重組抗原蛋白作為備選抗原點(diǎn)至于環(huán)氧基玻片上制備蛋白芯片。②選用50份包蟲病病人血清和50份正常人血清篩選診斷抗原。⑨采用博奧LuxScan HT24掃描儀于λ=532nm波長(zhǎng)處掃描讀取數(shù)據(jù)。④對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行校準(zhǔn)后利用Mev軟件制作抗原抗體反應(yīng)熱圖譜。3.制備及評(píng)價(jià)棘球絳蟲重組抗原:①采用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)對(duì)候選診斷抗原進(jìn)行表達(dá)和純化。②對(duì)重組抗原蛋白進(jìn)行ELISA評(píng)估。
  結(jié)果:1.對(duì)目前公開的數(shù)據(jù)庫(kù)

3、進(jìn)行檢索并序列比對(duì)之后共采集到10780條有效多房棘球絳蟲全基因組蛋白質(zhì)序列。其中,共發(fā)現(xiàn)875條含有信號(hào)肽的蛋白序列,307條屬于膜結(jié)合蛋白;38條含糖基磷脂酰肌醇(Glycosyl-phosphatidylinositol,GPI)錨定位點(diǎn);12條定位于線粒體。最終獲得了含518條序列的多房棘球絳蟲分泌蛋白組,占全基因組編碼蛋白序列的4.8%(518/10780)。經(jīng)Blast2GO和KAAS軟件注釋分析后結(jié)果顯示分泌蛋白主要出現(xiàn)在

4、人類疾病、新陳代謝過(guò)程、環(huán)境信息處理、有機(jī)系統(tǒng)、細(xì)胞過(guò)程和遺傳信息處理通路上,其中有6條序列與寄生蟲感染直接相關(guān)。2.成功制備含188個(gè)無(wú)細(xì)胞麥胚表達(dá)的棘球絳蟲重組蛋白與陽(yáng)性陰性參照點(diǎn)的蛋白芯片,經(jīng)血清篩選后(閾值≥2.0作為陽(yáng)性陰性反應(yīng)臨界值),共獲得6個(gè)敏感性較高的潛在診斷抗原,分別是EgP9、EgP11、EgP22、EgP43、EgP44和EgP164,其敏感性依次達(dá)到74%(37/50)、44%(22/50)、20%(10/50

5、)、40%(20/50)、50%(25/50)、24%(12/50),特異性為98%(49/50)、100%(50/50)、100%(50/50)、100%(50/50)、100%(50/50)、100%(50/50)。3.采用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)對(duì)已篩選到的6個(gè)診斷抗原進(jìn)行大量表達(dá)與純化,其結(jié)果顯示:EgP9、EgP11、EgP22、EgP43、EgP164表達(dá)成功,其中EgP9/22/43/164以可溶形式表達(dá),EgP11為包涵體形

6、式表達(dá)。采用酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)(ELISA)方法對(duì)制備的重組抗原進(jìn)行初步評(píng)估,其結(jié)果顯示EgP9/11/22/43/44/164/HCF的敏感性分別達(dá)到83%(34/41)、56%(23/41)、88%(36/41)、49%(20/41)、68%(28/41)、83%(34/41)和100%(41/41),特異性分別達(dá)到96%(45/47)、96%(45/47)、98%(46/47)、96%(46/47)、96%(46/47)、94%(4

7、4/47)和98%(46/47)。對(duì)重組抗原EgP9/22/164/P43蛋白進(jìn)行大規(guī)模血清學(xué)評(píng)價(jià),其敏感性依次達(dá)到42%(65/156),53%(82/156),50%(78/156)和73%(115/157),特異性為94%(89/95),96%(92/96),94%(90/96)和96%(92/96)。四個(gè)重組抗原的組合敏感性和特異性均達(dá)到了82%。重組抗原EgP9/43/164與其他蟲種之間的交叉反應(yīng)率明顯低于囊液粗抗原HCF。

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論