糖基化終產(chǎn)物增強小鼠胚胎成纖維細(xì)胞結(jié)締組織生長因子的表達.pdf

1、糖尿病是一組以高血糖為特征的代謝性疾病.持續(xù)高血糖是引起糖尿病患者各種并發(fā)癥的主要因素.糖尿病并發(fā)癥共同的病理過程是纖維化,以成纖維細(xì)胞的增殖和細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)的過度產(chǎn)生為特征.糖基化終產(chǎn)物(advanced glycosylation end products,AGEs)是還原糖與蛋白質(zhì)等的游離氨基端通過非酶促反應(yīng)形成的產(chǎn)物,AGEs在機體的不同組織中沉積促進了糖尿病并發(fā)癥的發(fā)展[<'1,

2、2>].結(jié)締組織生長因子(connective tissue growth factor,CTGF)是一種富含半胱氨酸的多肽[<'3>],屬于即刻早期生長反應(yīng)性基因中的CCN家族.CTGF具有致纖維化作用,可刺激細(xì)胞增殖、趨化、粘附,細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生和血管生成[<'4,5>].研究表明,CTGF在皮膚、肝、腎、肺、胰腺以及心血管系統(tǒng)纖維化等病變中,均出現(xiàn)了高表達[<'6-11>].我們推測AGEs通過誘導(dǎo)CTGF的產(chǎn)生在糖尿病并發(fā)纖維化的

3、發(fā)病機制中起重要作用.氨基胍(aminoguanidine,AG)為親核肼類化和物,能捕獲Maillard反應(yīng)中羰基產(chǎn)物進而抑制AGEs形成.研究證明氨基胍能防止糖尿病腎病、視網(wǎng)膜病變和神經(jīng)病變的發(fā)生發(fā)展[<'12>].葛根素(puerarin,Pue)可能是一種醛糖還原酶抑制劑[<'13>],能抑制蛋白非酶糖化[<'14>],抗氧自由基損害[<'15>],并降低血糖[<'16>],其在糖尿病中的治療正逐漸受到重視.該研究采用體外培養(yǎng)N

4、IH Swiss小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(NIH/3T3),觀察AGEs對CTGF基因表達的影響,以期將AGEs、CTGF、纖維化聯(lián)系起來,并探討氨基胍、葛根素的干預(yù)作用.葡萄糖和牛血清白蛋白(BSA)在體外共同孵育制備AGE-BSA,運用熒光法測定AGEs水平.分別用不同濃度葡萄糖(0、20、50、80 mmol·L<'-1>)制備的AGE-BSA(200 mg·L<'-1>)干預(yù)NIH/3T3細(xì)胞24 h;用葡萄糖濃度為50 mmol·L

5、<'-1>的AGE-BSA(200mg·L<'-1>)干預(yù)NIH/3T3細(xì)胞0、6、12、24、48 h;用經(jīng)100mmol·L<'-1>氨基胍預(yù)先處理的50 mmol·L<'-1>葡萄糖修飾的AGE-BSA,即AGE-BSA-AG對NIH/3T3細(xì)胞干預(yù)24 h.以不同濃度的葛根素(0、0.25、0.5、1.0、1.5 mg·ml<'-1>)預(yù)先對NIH/3T3細(xì)胞干預(yù)12 h,換液后,再加入50 mmol·L<'-1>葡萄糖修飾的A

6、GE-BSA(200 mg·L<'-1>)干預(yù)24 h.用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測細(xì)胞中CTGF mRNA的表達水平.結(jié)果顯示:1.AGEs的形成與葡萄糖濃度、孵育時間呈正相關(guān).2.CTGF mRNA的表達隨著孵育AGE-BSA的葡萄糖濃度增加而增加,以50 mmol·L<'-1>時最明顯.并且其表達隨AGE-BSA的干預(yù)時間延長而增強,以24 h時最明顯.3.加入氨基胍后,CTGFmRNA的表達減少.4.預(yù)先加入不同