組織工程和再生醫(yī)學(xué)中脫細(xì)胞生物基質(zhì)的制備及其生物相容性研究.pdf

1、該研究通過(guò)對(duì)0.25﹪胰酶不同脫細(xì)胞時(shí)間處理、不同濃度胰酶處理、Dispase脫細(xì)胞法、1M、2M高滲鹽水脫細(xì)胞法、高滲鹽水和胰酶工Dispase混合脫細(xì)胞法的比較確認(rèn)采用0.125﹪胰酶,4℃,24小時(shí)可脫盡豬真皮內(nèi)細(xì)胞;胰酶脫細(xì)胞法和Dispase脫細(xì)胞法在病理切片上無(wú)顯著性差異,而單純的高滲鹽水脫細(xì)胞方法的可行性值得商榷,至于高滲鹽水和胰酶或Dispase混合脫細(xì)胞法,它與單純的胰酶或Dispase脫細(xì)胞法無(wú)顯著性差異.實(shí)驗(yàn)對(duì)脫細(xì)

2、胞后基質(zhì)中細(xì)胞碎片的清除進(jìn)行了比較研究選用了0.5﹪Triton X-100和0.5﹪SDS,對(duì)比研究后發(fā)現(xiàn),用0.5﹪Triton X-100及其與0.5﹪SDS的1：1.25、1：1、1：0.75、1：0.5、1：0.25、1：0.125混合液洗滌,按該實(shí)驗(yàn)方法效果不佳,而0.5﹪SDS振蕩洗滌3小時(shí)可較好地清除細(xì)胞碎片.但是,經(jīng)這樣洗滌清除細(xì)胞碎片后基質(zhì)的物理性能與洗滌前相比顯著降低.研究中發(fā)現(xiàn)真皮基質(zhì)經(jīng)脫細(xì)胞后其膠原結(jié)構(gòu)崩解,為

3、防止膠原結(jié)構(gòu)崩解對(duì)基質(zhì)進(jìn)行脫細(xì)胞前用戊二醛固定.實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)4﹪戊二醛對(duì)基質(zhì)交聯(lián)固定后,若交聯(lián)時(shí)間短,則與不交聯(lián)組無(wú)差異時(shí)間稍長(zhǎng),則胰酶無(wú)法脫除細(xì)胸.為了提高脫細(xì)胞后基質(zhì)的強(qiáng)度和調(diào)控基質(zhì)體內(nèi)降解速率,實(shí)驗(yàn)選擇了戊二醛對(duì)脫細(xì)胞生物基質(zhì)交聯(lián)固定,結(jié)果顯示戊二醛可以大大提高經(jīng)SDS洗滌后脫細(xì)胞基質(zhì)的物理性能.α-半乳糖殘基是豬到人的主要異種抗原,會(huì)導(dǎo)致超急性免疫排斥,要實(shí)現(xiàn)豬到人的異種移植首先要去除的就是α-Gal.所以實(shí)驗(yàn)對(duì)制備的基質(zhì)進(jìn)行了α-

4、Gal的定性測(cè)試.免疫組化結(jié)果顯示經(jīng)胰酶和Dispase處理后及SDS洗滌后的脫細(xì)胞基質(zhì)均無(wú)α-Gal活性.實(shí)驗(yàn)測(cè)定了脫細(xì)胞基質(zhì)的細(xì)胞毒性,結(jié)果表明,經(jīng)SDS洗滌及戊二醛交聯(lián)固定后的基質(zhì)應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格清洗,否則會(huì)表現(xiàn)細(xì)胞毒性,這主要是因?yàn)镾DS洗滌后會(huì)殘留于基質(zhì)中,而且洗脫比較困難,但是只要徹底清洗,采用該實(shí)驗(yàn)方法仍可做到基質(zhì)細(xì)胞毒性.通過(guò)對(duì)基質(zhì)進(jìn)行鼠成纖維細(xì)胞培養(yǎng)、種植上的細(xì)胞形態(tài)學(xué)掃描電鏡觀察及在兔觀肉和皮下組織相容性觀察,可以初步認(rèn)定