膳食鈣對(duì)一氧化氮缺乏型高血壓大鼠血壓的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、大量的臨床調(diào)查顯示，膳食中缺鈣是引起高血壓的一個(gè)重要因素。許多干預(yù)試驗(yàn)證實(shí)，補(bǔ)充鈣可使某些血壓正常者和高血壓受試者的血壓在短期內(nèi)輕微下降。對(duì)其機(jī)制研究表明高血壓病(EHT)患者存在多種細(xì)胞膜鈣轉(zhuǎn)運(yùn)缺陷，最終導(dǎo)致高細(xì)胞游離鈣；它可以通過興奮-收縮、興奮-代謝“偶聯(lián)”，增高平滑肌張力和血管阻力，從而血壓升高、血管損傷。 目前的研究表明，高鈣飲食可以延緩由L—NAIMIE引起的高血壓的發(fā)展，膳食鈣對(duì)一氧化氮缺乏型高血壓大鼠的降壓機(jī)制在

2、于增加動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞超極化和對(duì)NO的敏感性，以及減少過氧化物和縮血管物質(zhì)前列腺素的生成。膳食鈣通過NO降壓是一條很重要的機(jī)制，涉及環(huán)節(jié)較多，其可能的機(jī)制可以概括如下：膳食鈣可以提高GTPCH-1活性，從而促進(jìn)BH4合成，提高NOS的活性，最終促進(jìn)NO生物合成。但膳食鈣是如何提高GTPCH-1活性的機(jī)制，還有待進(jìn)一步研究。 本實(shí)驗(yàn)以一氧化氮缺乏型高血壓大鼠為研究對(duì)象，通過觀察大鼠血壓、血清NO濃度、NOS活性、BH4水平、主動(dòng)

3、脈GTPCH-1,GFRP Mrna表達(dá)的變化，研究膳食鈣通過NO降壓的可能機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)分兩部分實(shí)施：第一部分于2005-10-22至2006-01-13在解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室及形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)室完成。取健康11周齡雄性SD大鼠24只，大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)2周，此期間均給予基礎(chǔ)飼料，喂養(yǎng)飼養(yǎng)溫度22℃，自由進(jìn)食飲水。然后按體重區(qū)組隨機(jī)分成4組，每組6只，分別是對(duì)照組：基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，從實(shí)驗(yàn)開始到第6周末將40mg／(

4、kg.d)去離子水灌胃，從第7周開始停止去離子水灌胃。 第一組：從實(shí)驗(yàn)開始到第6周末給予5．0％(w／w)的高鈣膳食和40 mg/(kg．d)去離子水灌胃，從第7周開始停止去離子水灌胃。第二組：從實(shí)驗(yàn)開始到第6周末將40mg，(kg.d)L—NAME；容于去離子水中灌胃；其間飼以基礎(chǔ)飼料。從第7周開始停止L—NANE灌胃，開始給予5．0％(w／w)的高鈣膳食。第三組：從實(shí)驗(yàn)開始到第6周末將40mg/(kg.d)L—NAME；容于

5、去離子水中灌胃，從第7周開始停止L—NAME灌胃，基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，所有實(shí)驗(yàn)大鼠飼養(yǎng)期間均飲用去離子水。每天早晨8：30喂食一次，晚上19：00點(diǎn)灌胃，并自由飲水，每天12h光照周期應(yīng)用RBP-1型大鼠血壓儀測(cè)量血壓，10周后處死所有大鼠，硝酸還原酶法檢測(cè)血清中一氧化氮的濃度和一氧化氮合酶活性。 第二部分于2006-3-30至2006-08-17進(jìn)行。再取健康11周齡雄性SD大鼠40只，大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)2周，此期間均給予基礎(chǔ)飼料，喂養(yǎng)

6、飼養(yǎng)溫度22℃，自由進(jìn)食飲水。然后按體重區(qū)組隨機(jī)分成5組，每組8只，分別為第一組：從實(shí)驗(yàn)開始到第6周末給予5．0％(w／w)的高鈣膳食和40 rag／(kg．d)L-NAME溶于去離子水中灌胃，從第7周開始停止L—NAME灌胃。 第二組：從實(shí)驗(yàn)開始到第6周末將40mg，(kg.d)L—NAME；容于去離子水中灌胃；其間飼以基礎(chǔ)飼料。從第7周開始停止L—NAME灌胃，開始給予5．0％(w／w)的高鈣膳食。 第三組：基礎(chǔ)飼料

7、+L—NAME，從實(shí)驗(yàn)開始到第6周末將40mg，(kg.d)L—NAME溶于去離子水中灌胃，從第7周開始停止L—NAME灌胃。對(duì)照組：基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，從實(shí)驗(yàn)開始到第6周末將40mg，(kg.d)去離子水灌胃，從第7周開始停止去離子水灌胃。 第四組：從實(shí)驗(yàn)開始到第6周末給予5.0％(w/w)的高鈣膳食和40 mg/(kg.d)去離子水灌胃，從第7周開始停止去離子水灌胃。所有實(shí)驗(yàn)大鼠飼養(yǎng)期間均飲用去離子水。每天早晨8：30喂食一次，晚

8、上19：00點(diǎn)灌胃，并自由飲水，每天12h光照周期。每周應(yīng)用RBP-1型大鼠血壓儀測(cè)量血壓，10周后處死所有大鼠。BH4標(biāo)準(zhǔn)品購自美國Sigma公司。一步法RT-PCR試劑盒購自invitrogen公司。10周后處死所有大鼠。應(yīng)用HPLC測(cè)定BH4水平及采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR))方法測(cè)定大鼠主動(dòng)脈GTPCH-1和GFRP Mrna的表達(dá)水平。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 (1)血壓：從實(shí)驗(yàn)第4周開始第二組和第三組明顯高于對(duì)照

9、組和第一組(P<0．01)，從第7周到第10周實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，第三組血壓明顯高于其他3組(P<0．01)。 (2)血清一氧化氮濃度：對(duì)照NI'~-于第一組和第二組[(8 81±6 63)，(14．80±5．32),(15．26±3．55)μmo1／L,P<0．05]，但高于第三組[(2.89±1.71)μmo1／L,P<0．05]；第一組和第二組比較差異不顯著(P>0.05)；第二組則高于第三(P<0．05)。 (3)血清一

10、氧化氮合酶活性：對(duì)照組低于第一組和第二組[(334．57±74．35)，(436.09±69.35)，(448.76±45.68)μkat／L，P<0.05]，但高于第三組[(255．88±35．17)μtkat／L,P<0．05]；第一組和第二組比較差異不顯著(P>0.05)；第二組則高于第三(P<0．05)。 (4)BH4：第一組和第二組BH4水平明顯低于對(duì)照組和第四組(P<0.01)，第三組BH4水平顯著低于其他4組(P<

11、0.01)。 (5)GTPCH-1：第一組和第二組GTPCH-1 Mrna的水平表達(dá)明顯低于對(duì)照組和第四組(P<0．05)，第三組GTPCH-1 Mrna的水平表達(dá)顯著低于其他4組(P<0．05)。 (6)GFRP：第一組和第二組GFRP Mrna的水平表達(dá)明顯高于對(duì)照組和第四組(P<0．05)，第三組GFRP Mrna的水平表達(dá)顯著高于其他4組（P<0．05）。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論 (1)膳食鈣能夠降低一氧化氮缺