環(huán)孢霉素A對(duì)大鼠主動(dòng)脈移植物移植后病理變化及腫瘤壞死因子影響的研究.pdf

1、目的：
　　 同種異體主動(dòng)脈移植行主動(dòng)脈替換術(shù)或右室流出道重建,使心臟外科領(lǐng)域開辟了一種新的治療途徑。1966年Ross和Someville應(yīng)用同種異體帶瓣主動(dòng)脈進(jìn)行右室流出道重建術(shù)獲得成功。但早期同種異體帶瓣主動(dòng)脈的臨床效果并不滿意,主要表現(xiàn)為鈣化,瓣膜退變等。隨著滅菌方法和低溫保存技術(shù)的進(jìn)步,同種異體主動(dòng)脈的應(yīng)用得到了重新重視。與人工生物瓣膜和機(jī)械瓣膜相比,同種異體帶瓣主動(dòng)脈易于植入,出血少,跨瓣壓力階差小,血栓形成率、溶血

2、發(fā)生率明顯降低。目前,人們普遍關(guān)心的問題在于移植物的遠(yuǎn)期效果。目前面臨的是同種異體主動(dòng)脈移植物的退化,鈣化及梗阻等問題。免疫排斥反應(yīng)在主動(dòng)脈移植物中起著非常重要的作用,因此研究同種異體血管的移植免疫排斥反應(yīng)不但能明確其排斥反應(yīng)的機(jī)理,還能夠指導(dǎo)臨床工作,為尋找合適的抑制免疫排斥反應(yīng)藥物提供理論依據(jù)。TNF-a是單核因子,主要由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生,是免疫炎性反應(yīng)的重要細(xì)胞因子。本研究通過建立同種異體主動(dòng)脈補(bǔ)片移植模型,研究環(huán)孢霉素A對(duì)

3、大鼠同種異體主動(dòng)脈補(bǔ)片移植后免疫指標(biāo)腫瘤壞死因子(TNF-α)的影響,以及移植物的病理變化。
　　 材料與方法
　　 選擇健康Wistar大鼠48只作為受體,SD的大鼠20只作為供體,將Wistar大鼠隨機(jī)分為3組,每組16只。實(shí)驗(yàn)組:將液氮低溫保存的SD大鼠的主動(dòng)補(bǔ)片異位植入Wistar大鼠的腹主動(dòng)脈。免疫干預(yù)組:將液氮低溫保存的SD大鼠的主動(dòng)補(bǔ)片異位植入Wistar大鼠的腹主動(dòng)脈,移植后第一天開始給予環(huán)孢霉素A,劑量

4、5mg/kg/day。對(duì)照組:假移植組,將腹主動(dòng)脈縱行切開后直接吻合。移植后每組分別于術(shù)后3天、7天、14天、21天取材,每組每次處死4只大鼠。實(shí)驗(yàn)大鼠用10％水合氯醛液2 ml/kg 麻醉,在無(wú)菌條件下開腹行腹主動(dòng)脈取血,取血后1500rpm 離心15分鐘取血清。收集血清后置于-80℃冰箱保存,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)測(cè)定其TNF-α活性。移植大鼠腹主動(dòng)脈放血后,在顯微鏡下分離取出移植物。經(jīng)生理鹽水沖洗后,置4％多聚甲醛固定6-2

5、4h,常規(guī)脫水,石蠟包埋,制成2μm石蠟切片,HE染色。然后觀察外膜單核細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,組間比較采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析,兩兩比較用多重比較t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1、病理變化:實(shí)驗(yàn)組可明顯看到大量單核細(xì)胞浸潤(rùn),與對(duì)照組相比有顯著性差異(P<0.05)。免疫干預(yù)組也可見明顯單核細(xì)胞浸潤(rùn),但實(shí)驗(yàn)組與之相比

6、有明顯差異(P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2、TNF-α,活性變化:實(shí)驗(yàn)組可明顯看到TNF-α活性明顯升高,與對(duì)照組相比有顯著性差異(P<0.05)。免疫干預(yù)組也可見TNF-α活性明顯升高,但實(shí)驗(yàn)組與之相比有明顯差異(P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1、低溫保存同種異體主動(dòng)脈移植物移植后有明確的免疫排斥反應(yīng)發(fā)生。
　　 2、環(huán)孢霉素A對(duì)主動(dòng)脈異體移植物移植后單核細(xì)胞的浸