腸化和不典型增生胃粘膜組織環(huán)氧化酶-2、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)及其與幽門螺桿菌感染的相關(guān)性研究.pdf

1、前言: 胃癌的發(fā)病是一個(gè)多因素，多階段的復(fù)雜發(fā)展過程，涉及多種基因調(diào)控的異常改變。迄今為止的研究表明：幽門螺桿菌(Helicobacterpylori，H.pylori)感染和胃癌的發(fā)生密切相關(guān)，已被WHO列為I類致癌因子。環(huán)氧化酶(Cyclooxygenase，COX)是花生四烯酸代謝成前列腺素過程中的限速酶，COX不僅是啟動(dòng)炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵酶，還與原癌基因的突變、腫瘤促進(jìn)因子、細(xì)胞因子及其受體乃至病原菌如H.pylori感染有

2、關(guān)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascularendothelialgrowthfactors，VEGF)是刺激腫瘤血管、淋巴管生成的主要細(xì)胞因子。本實(shí)驗(yàn)是在現(xiàn)有的研究基礎(chǔ)上，通過觀察各種病變的胃粘膜組織中H.pylori感染與COX-2，VEGF的表達(dá)水平，探討三者在癌前病變組織內(nèi)的相互關(guān)系，進(jìn)一步評(píng)估在胃癌癌前病變組織與胃癌組織中三者的表達(dá)有何異同，闡明H.pylori感染是通過誘生COX-2再促進(jìn)VEGF的表達(dá)，還是H.pylori感染直

3、接刺激VEGF的表達(dá)，或兩者兼有，以期為臨床應(yīng)用COX-2抑制劑、選擇性血管抑制劑，預(yù)防和治療H.pylori相關(guān)性胃疾病提供理論依據(jù)。 材料與方法: 標(biāo)本：收集2007年11月-2008年12月因上消化道癥狀于我院行胃鏡檢查取病理活檢者172例(除外2個(gè)月內(nèi)接受過抗H.pylori治療及服用過NSAID者)，男80例，女92例，年齡35歲-80歲，平均年齡53±12歲。其中慢性淺表性胃炎(chronicsuperfic

4、ialgastritis，CSG)胃粘膜組織36例；慢性萎縮性胃炎(chronicatrophicgastritis，CAG)胃粘膜組織36例，均不伴有腸化和(或)不典型增生；中度以上的腸上皮化生胃粘膜組織(intestinalmetaplasia，IM)44例，腸化不伴有萎縮及不典型增生；中度以上不典型增生胃粘膜組織(dysplasia，DYS)56例。 主要試劑：鼠抗人COX-2單克隆抗體；兔抗人VEGF多克隆抗體；免疫組化

5、SABC染色試劑盒和DAB顯色液；伊紅；Giemsa染色液主要儀器：石蠟切片機(jī)、冰箱、微波爐、奧林巴斯顯微鏡實(shí)驗(yàn)方法：以HE染色后光學(xué)顯微鏡下見“S”型彎曲桿狀細(xì)菌和改良Giemsa染色后鏡下見典型的紫蘭色螺旋樣菌為H.pylori陽(yáng)性，兩項(xiàng)均陽(yáng)性者即診斷為H.pylori感染；免疫組織化學(xué)SABC法測(cè)胃粘膜組織中COX-2、VEGF的表達(dá)，以PBS替代-抗作陰性對(duì)照，用已知COX-2和VEGF表達(dá)陽(yáng)性的乳腺癌組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照，陽(yáng)性

6、細(xì)胞為胞漿內(nèi)和(或)細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，采用病理圖文報(bào)告分析系統(tǒng)進(jìn)行平均光密度測(cè)定，將免疫組化染色結(jié)果轉(zhuǎn)化為平均光密度值(averageopticaldensity，AOD)進(jìn)行定量分析；應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行x2檢驗(yàn)、單因素方差分析、Scheffe法、t檢驗(yàn)及Pearson相關(guān)性檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P<0.01表示有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)果: (1)不同病變胃粘膜組織中H.py

7、lori表達(dá)以DYS組最高76.8％，其次為IM組63.6％，CAG組58.3％，CSG組最低27.8％，各組之間統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異顯著(P<0.01)。 (2)COX-2蛋白的平均光密度值(AOD)CSG組最低13.81±5.53，CAG組為45.28±21.44，IM組為73.67±26.02，DYS組最高為91.23±45.11，IM、DYS組間的表達(dá)程度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，余各組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05

8、)，IM、DYS與CSG組間差異顯著(P<0.01)。VEGF蛋白的AOD值CSG、CAG、IM三組分別為1.00±1.18、1.48±1.24、1.58±0.90，三組間差異不顯著，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但與DYS組9.54±9.15比較差異顯著(P<0.01)。 (3)H.pylori感染與COX-2表達(dá)的關(guān)系：COX-2在H.pylori感染陽(yáng)性CAG、IM及DYS組的表達(dá)程度明顯高于H.pylori感染陰性組，尤其IM和DYS組

9、內(nèi)差異顯著(P<0.01)。 (4)H.pylori感染與VEGF表達(dá)的關(guān)系：VEGF的表達(dá)程度在H.pylori感染陽(yáng)性與H.pylori感染陰性組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 (5)COX-2與VEGF的相關(guān)性分析：隨著胃粘膜病變程度的加重，COX-2與VEGF的表達(dá)水平成明顯正相關(guān)性(r=0.640，P<0.01)。 討論: IM和DYS統(tǒng)稱癌前病變，是胃癌發(fā)生的不同階段，H.pylori感

10、染是公認(rèn)的胃癌I類致癌因子，主要作用于癌變的起始階段。在本實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)H.pylori感染率在DYS組最高，其次為IM、CAG、CSG，各組之間比較具有顯著性差異(P<0.01)，證明H.pylori感染在胃癌發(fā)生的早期即起一定作用，隨著病變的加重H.pylori感染率逐漸升高。近年研究表明，COX-2有促進(jìn)細(xì)胞增生、抑制細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)腫瘤新生血管形成的促癌作用。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示COX-2蛋白的表達(dá)程度在CSG組最弱，隨著病變程度的

11、加重其表達(dá)呈遞增趨勢(shì)，IM、DYS兩組之間的表達(dá)程度無(wú)差異(P>0.05)，余各組之間差異顯著(P<0.05)，尤其IM、DYS與CSG組之間比較差異顯著(P<0.01)，提示COX-2在癌前病變的胃粘膜組織即開始較高表達(dá)，且COX-2表達(dá)的上調(diào)程度與胃粘膜病變程度有關(guān)，分析其機(jī)制可能為：長(zhǎng)期H.pylori感染引起胃粘膜上皮損傷誘導(dǎo)COX-2的表達(dá)，導(dǎo)致包括COX-2的多個(gè)原癌基因激活，抑癌基因失活，粘膜細(xì)胞增殖與凋亡失衡。VEGF是

12、目前了解最為深入的血管生成家族，其作用是刺激腫瘤血管、淋巴管生成，在胃癌的早期即有所分泌，參與微血管的形成，而微血管的生成直接影響胃癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后。本試驗(yàn)結(jié)果，在CAG、IM及DYS胃粘膜病變的不同階段，H.pylori陽(yáng)性胃粘膜病變組織的COX-2的表達(dá)程度均高于H.pylori陰性者，尤其IM及DYS組差異更加明顯，說明H.pylori感染可以使COX-2表達(dá)增強(qiáng)，并且可能主要作用在胃癌發(fā)生的前期；H.pylori感染各階段的

13、胃粘膜病變組織VEGF的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，即H.pylori感染對(duì)VEGF在胃粘膜病變中的表達(dá)無(wú)影響；但隨著胃粘膜病變程度的加重，COX-2與VEGF的表達(dá)水平成明顯正相關(guān)性，其可能的機(jī)制是COX-2通過催化合成前列腺素PGE2、誘導(dǎo)VEGF表達(dá)上調(diào)，而VEGF又通過KDR信號(hào)傳導(dǎo)通路進(jìn)一步誘導(dǎo)COX-2表達(dá)，二者通過相互作用而促進(jìn)腫瘤血管生成，加速胃癌癌前病變向胃癌發(fā)展的進(jìn)程。因此H.pylori感染誘導(dǎo)COX-2的表達(dá)上調(diào)，COX-

14、2的高表達(dá)又促使了VEGF的表達(dá)，在胃癌癌前病變向胃癌的發(fā)展中起重要作用。由理論推知進(jìn)行臨床除菌治療、應(yīng)用選擇性COX-2抑制劑及血管抑制劑，可以在一定程度上預(yù)防胃癌癌前病變向胃癌的轉(zhuǎn)化。 結(jié)論: (1)COX-2表達(dá)在DYS中最強(qiáng)；VEGF在胃粘膜病變初期呈微弱表達(dá)，僅在DYS時(shí)始表達(dá)增強(qiáng)。 (2)H.pylori感染的CAG、IM、DYS粘膜組織COX-2表達(dá)增強(qiáng)，H.pylori感染與VEGF表達(dá)無(wú)關(guān)，提示