一種新型小口徑人工血管的制備——去內(nèi)皮異種血管再內(nèi)皮化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目前，各種直徑大小的血管移植物的需求日益增多。臨床應(yīng)用中，一般認(rèn)為Dacron(滌綸)、ePTFE(聚四氟乙烯)等合成型血管在大口徑血管移植中效果可靠，有肯定的遠(yuǎn)期通暢率。但是，在小口徑血管(內(nèi)徑＜6mm)移植中，由于血管中高張力、低血流的特殊狀態(tài)，導(dǎo)致了很高的移植失敗率。小口徑血管移植物的研究仍然面臨很大困難：合成型血管由于吻合處易發(fā)生內(nèi)膜增生和血栓形成，遠(yuǎn)期通暢率并不滿意；自體血管由于來源有限，異體血管和異種血管由于易產(chǎn)生免疫排斥反

2、應(yīng)，臨床應(yīng)用也受到限制；組織工程化血管的制備工藝還不成熟。因此，構(gòu)建一種良好的小口徑血管移植物正成為人工血管研究的熱點(diǎn)。本研究采用原代培養(yǎng)的兔動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞作為種子細(xì)胞，以超低溫處理去除內(nèi)皮細(xì)胞的大鼠頸動(dòng)脈血管為血管基質(zhì)，旋轉(zhuǎn)加靜態(tài)培養(yǎng)使其完成內(nèi)皮化，然后進(jìn)行植入兔股動(dòng)脈的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，為小口徑血管移植材料的研究嘗試新的思路，并探討異種血管移植的免疫排斥及早期通暢率等問題。 本研究的主要內(nèi)容和結(jié)論是： 1.采用改進(jìn)的Ⅱ型膠原酶

3、消化法獲取兔動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞，進(jìn)行原代及傳代培養(yǎng)，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。光鏡下觀察，酶消化法分離、培養(yǎng)的原代兔動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞呈典型的“鋪路石”狀鑲嵌排列，細(xì)胞為扁平多角形。透射電鏡下可見培養(yǎng)細(xì)胞漿內(nèi)Weibel-Palade小體。結(jié)果表明，培養(yǎng)的原代內(nèi)皮細(xì)胞具有內(nèi)皮細(xì)胞的正常特征，可以用于實(shí)驗(yàn)研究。 2.采用超低溫處理去除Wistar大鼠頸總動(dòng)脈(內(nèi)徑約1mm)的內(nèi)皮細(xì)胞。H&E染色和掃描電鏡觀察的結(jié)果顯示，采用超低溫處理的Wistar大

4、鼠頸動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞完全去除，處理后的血管其他組織保留完整。 3.原代培養(yǎng)至2-3代的兔動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(RAECs)高密度(2×106cell/cm2)接種于去除內(nèi)皮細(xì)胞的大鼠血管內(nèi)腔面，旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)2h后，再在37℃，5％CO2條件下靜態(tài)培養(yǎng)3-5天。AgNO3染色和掃描電鏡下觀察：將RAECs種植于超低溫處理后的大鼠頸總動(dòng)脈內(nèi)腔面3-5天后，細(xì)胞完全覆蓋血管內(nèi)壁，融合成單層。 4.以正常異體兔股動(dòng)脈(RAGs)組和去內(nèi)皮W

5、istar大鼠頸動(dòng)脈(DRAGs)組作為對(duì)照組，將重新內(nèi)皮化Wistar大鼠頸動(dòng)脈(RRAGs)植入兔股動(dòng)脈，進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(每組六只)，檢測(cè)組織病理學(xué)變化、內(nèi)皮細(xì)胞覆蓋情況及其早期的通暢率。通過掃描電鏡和H&E染色切片觀察：移植后1周，RRAGs組移植段內(nèi)腔有大量?jī)?nèi)皮細(xì)胞，外膜少量淋巴細(xì)胞浸潤，與RAGs組結(jié)果類似；而DRAGs組內(nèi)腔彈力膜裸露，少量?jī)?nèi)皮細(xì)胞覆蓋，外膜大量淋巴細(xì)胞浸潤。移植后4周，RRAGs組移植段通暢，內(nèi)腔基本被內(nèi)皮細(xì)