西羅莫司對提高小口徑異種移植血管性能的初步研究.pdf

1、第一部分:目的：利用去污劑-酶消化法[8-9]對犬頸動脈進行脫細胞并聯(lián)合肝素處理，構(gòu)建小口徑異種移植血管，建立異種動物移植模型以觀察移植血管遠期通暢效果。
　　 方法：
　　 1.取熱缺血時間小于5分鐘的犬頸動脈，用含青霉素鉀的生理鹽水沖洗管腔，輕柔剝離外層疏松結(jié)締組織。將血管材料截成5cm 長放入4℃Hanks 液中備用。血管材料隨機分為三組：A組（新鮮犬頸動脈）、B組（犬頸動脈僅脫細胞處理）、C組（脫細胞后的犬頸動脈

2、結(jié)合肝素處理）。
　　 2.建立異種動物移植模型：成年家兔8只，體重2.2～3.0kg，雌雄不限，作自身配對：左側(cè)頸動脈為甲組，移植B組血管材料；右側(cè)頸動脈為乙組，移植C組血管材料。
　　 觀察指標：取三組樣本進行電鏡觀察，評價樣本的總體形態(tài)；對B、C兩組樣本進行甲苯胺藍染色，觀察肝素結(jié)合效果。術(shù)后5天B 型超聲觀察移植血管的通暢情況。術(shù)后5天從原切口取B組樣本進行HE 染色，觀察有無炎癥細胞浸潤。
　　 結(jié)果：

3、掃描電鏡觀察：A組樣本內(nèi)表面覆蓋完整的內(nèi)皮細胞，細胞排列緊密。B、C兩組經(jīng)脫細胞處理后，內(nèi)皮細胞去除徹底，并呈纖維孔狀結(jié)構(gòu)；甲苯胺藍染色：C組管壁染色陽性，B組染色陰性；動物實驗術(shù)中血管吻合良好，未見明顯滲漏。8只家兔術(shù)后均成活，無頭頸歪斜，頸動脈搏動良好；B 超觀察：8只家兔兩側(cè)移植血管均無血腫和管腔阻塞；HE 染色未見明顯炎癥細胞浸潤。
　　 結(jié)論：去污劑-酶消化法脫細胞效果徹底，細胞外基質(zhì)（ECM）保護好；肝素結(jié)合良好，覆

4、蓋于移植血管壁全層；肝素處理的血管樣本可以有效的防止血栓形成，并有較好的抗炎癥反應(yīng)作用。
　　 第二部分:目的：探索和評價脫細胞聯(lián)合肝素處理的小口徑異種移植血管，進一步結(jié)合西羅莫司，并建立兔頸動脈旁路移植模型以觀察術(shù)后移植血管內(nèi)膜增生的情況。
　　 方法：
　　 1.將脫細胞聯(lián)合肝素處理的犬頸動脈進一步結(jié)合西羅莫司，并分為兩組：A組（對照組，脫細胞并結(jié)合肝素）和B組（西羅莫司組，脫細胞并結(jié)合肝素+西羅莫司處理）。

5、
　　 2.兔頸動脈旁路移植模型的建立：健康家兔16只，隨機分為2組（每組8只），利用兔頸動脈旁路移植模型，分別移植A組和B組的血管進行比較。
　　 觀測指標：術(shù)后分別于1、2、4、8周取血，采用HPLC 法檢測B組移植血管中西羅莫司的含量。術(shù)后3個月超聲檢測移植血管通暢情況。術(shù)前取A、B兩組樣本行免疫組織化學(xué)染色。術(shù)后從原手術(shù)切口取A、B兩組樣本免疫組織化學(xué)染色，觀察兩組內(nèi)膜增生情況。
　　 HE 染色觀察內(nèi)膜

6、增生程度。
　　 結(jié)果：術(shù)后16只家兔均存活，頭頸無歪曲，術(shù)側(cè)頸動脈搏動好。移植血管縫合性能良好，吻合口未見滲漏。B組8周后仍可檢測到西羅莫司，且含量呈逐漸降低趨勢。術(shù)后3個月超聲顯示，A組部分血管（2/8）斑塊形成，管腔狹窄，B組血管無明顯狹窄（P<0.05）。
　　 免疫組織化學(xué)染色：術(shù)前A、B兩組均不見內(nèi)皮細胞。術(shù)后3個月A組血管內(nèi)表面可見新生內(nèi)皮細胞；HE 染色提示，B組內(nèi)膜增生程度較A組輕（A、B兩組內(nèi)膜/中膜