體外激活的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞趨化特性初探.pdf

1、目的:體外動態(tài)觀察被激活的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞趨化特性，為利用調(diào)節(jié)性T細(xì)胞誘導(dǎo)免疫耐受提供線索。 方法:1．分離純化人外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞：分離正常健康人外周血單個核細(xì)胞；加免疫磁珠富集CD4<'+>T細(xì)胞；加FITC標(biāo)記CD4抗體，APC標(biāo)記的CD25抗體，PE標(biāo)記CD127抗體上流式細(xì)胞儀分選出CD4hiCD127loCD25hi-int細(xì)胞即調(diào)節(jié)性T細(xì)胞并分析其純度和活率；2．調(diào)節(jié)性T細(xì)胞趨化特性觀察：純化的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與CD4<'

2、+>CD25-T分別用ConA(10 ug/ml)刺激0h、24h，48h后，用趨化因子CCL1，CCL5，CCL20，CCL22做趨化實(shí)驗(yàn)，觀察各趨化因子對調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與CD4<'+>CD25-T細(xì)胞趨化作用。 結(jié)果:分離得到的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞純度為97.4％，活細(xì)胞率為95％。得率：4.1％。CCL1，CCL20，CCL22均可趨化調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，且在細(xì)胞活化后趨化效率隨時間而改變。CCL1對調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的趨化指數(shù)較高而對CD4<

3、'+>CD25-T細(xì)胞趨化性很弱：CCL22對調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和CD4<'+>CD25-T細(xì)胞趨化指數(shù)都較高，但對調(diào)節(jié)性T細(xì)胞趨化作用更強(qiáng)：CCL20對調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和CD4<'+>CD25-T細(xì)胞趨化指數(shù)都很高；CCL5對調(diào)節(jié)性T細(xì)胞趨化性較弱。 結(jié)論:1．磁珠陰性分選結(jié)合流式細(xì)胞儀技術(shù)可分選出較高純度及活率的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。 2．與CD4<'+>CD25T細(xì)胞相比CCL1對調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的趨化作用較特異，CCL22趨化作用較強(qiáng)