自體表皮細胞-纖維蛋白膜創(chuàng)面移植治療燒傷的實驗研究.pdf

1、目的：1.為了解決單純表皮細胞懸液移植流動性大，不能在創(chuàng)面均勻分布影響治療效果，提出應用纖維蛋白膜作為培養(yǎng)表皮細胞的基質(zhì)。2.在進行大鼠表皮細胞的分離和培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，探討表皮細胞的生長特性，找出在纖維蛋白膜上最合適的表皮細胞接種密度，并觀察表皮細胞在其上面的的生長情況。3.利用構(gòu)造出的自體表皮細胞-纖維蛋白膜移植到大鼠燒傷皮膚缺損創(chuàng)面，探討自體表皮細胞-纖維蛋白膜移植治療大面積燒傷皮膚缺損的可行性。 方法：1.纖維蛋白膜的制(采

2、用一定濃度的凝血酶和等體積血漿混合的方法使纖維蛋白凝固，血漿與凝血酶之為1ml:10IU、1ml:50IU和1ml:100IU。用螺旋測微器來測量纖維蛋白膜的厚度。纖維蛋白膜的抗張強度及伸長率的測定：在分析儀上進行測量，用公式S=P/(AxB)和L=(L2-L1)/L1來進行計算。纖維蛋白膜的生物相容性的實驗采用直接觀察和組織學的方法2.采用大鼠表皮胰蛋白酶消化法進行細胞的分離，用臺盼藍染色檢測表皮細胞活力，并將表皮細胞接種到培養(yǎng)瓶內(nèi)培

3、養(yǎng)。同時進行表皮細胞的免疫組織化學染色來鑒定表皮細胞。光鏡下觀察原代培養(yǎng)表皮細胞的形態(tài)變化和生長情況。通過表皮細胞貼壁率的比較找出在纖維蛋白膜上最佳的的表皮細胞接種密度。并在纖維蛋白膜上觀察表皮細胞形態(tài)變化。3.建立大鼠皮膚缺損模型，分為對照組和自體表皮細胞.纖維蛋白膜移植組。術(shù)后觀察大鼠的精神狀態(tài)和皮膚缺損創(chuàng)面的愈合情況，記錄兩組大鼠皮膚缺損創(chuàng)面愈合的時間，計算創(chuàng)面的收縮率，同時進行比較創(chuàng)面愈合后出現(xiàn)瘢痕的情況。 結(jié)果：1、通

4、過實驗得出用稀釋比例為1ml:50IU的凝血酶溶液制備的纖維蛋白膜的物理性能最好。纖維蛋白膜具有良好的的生物相容性和降解性。2、大鼠表皮經(jīng)0.25％胰蛋白酶消化后分離出的表皮細胞的數(shù)量和活力均較好。表皮細胞接種到培養(yǎng)瓶后，開始的時候細胞呈圓形，單個或成團懸浮于培養(yǎng)基中，4～6h后便以單個或細胞團簇沉于瓶底，24h后大部分的表皮細胞開始貼附于瓶底生長。表皮細胞貼壁后成多角形，細胞核成圓形，細胞外觀透明，呈典型的鋪路石樣生長。表皮細胞抗角蛋

5、白抗體染色陽性，抗波形蛋白抗體染色陰性，證實了本實驗中所分離出的細胞為表皮細胞。通過比較不同接種密度下表皮細胞的貼壁率，發(fā)現(xiàn)表皮細胞在纖維蛋白膜上更容易貼壁生長，在纖維蛋白膜上表皮細胞的適合接種密度為5×104/cm2。剛接種到纖維蛋白膜上的表皮細胞細胞呈圓形，單個或幾個細胞成團呈懸浮狀態(tài)，24h后大部分的表皮細胞已經(jīng)貼附于纖維蛋白膜上，48h時貼壁的表皮細胞變大，向四周鋪展，72h時部分細胞出現(xiàn)死亡，培養(yǎng)基中可見到有漂浮的圓形細胞。3

6、、兩組大鼠手術(shù)后的狀態(tài)良好。B組的大鼠的創(chuàng)面愈合良好，無結(jié)痂的出現(xiàn)。A組的大鼠的傷口在愈合的過程中，術(shù)后的第二日起就開始結(jié)痂，最終為瘢痕愈合。在創(chuàng)面愈合時間上，B組的大鼠明顯比A組的大鼠的創(chuàng)面愈合時間要短。同時，在愈合后兩組大鼠創(chuàng)面收縮率的比較中，A組的大鼠創(chuàng)面愈合后收縮明顯，而B組的大鼠創(chuàng)面僅僅是略有收縮。A組大鼠最終創(chuàng)面愈合的方式為瘢痕愈合，B組大鼠的創(chuàng)面因為有移植的自體的表皮細胞在創(chuàng)面上生長增殖，愈合之后未見有嚴重瘢痕組織的出現(xiàn)。

7、 結(jié)論：1、纖維蛋白膜是血漿中的纖維蛋白原在凝血酶催化下產(chǎn)生的，它是一種可合成的，可降解的，無毒、無副作用，有良好生物相容性，對機體無害的生物材料。2、通過表皮胰蛋白酶消化法可以得到數(shù)量足夠多且細胞活力良好的表皮細胞。接種到纖維蛋白膜上的表皮細胞可以正常生長，兩者可以聯(lián)合得到表皮細胞-纖維蛋白膜。3、纖維蛋白膜可以促進表皮細胞的貼壁率，在纖維蛋白膜表面接種表皮細胞的最佳密度為5×104/cm2。4、自體表皮細胞-纖維蛋白膜在移植