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文檔簡介
1、目的:⑴探討去甲腎上腺素在慢性異源性應(yīng)激導(dǎo)致的內(nèi)臟痛覺過敏中的作用;⑵研究參與慢性異源性應(yīng)激誘導(dǎo)的內(nèi)臟痛覺過敏的腎上腺素能受體亞型;⑶研究電壓門控性鉀離子通道在慢性異源性應(yīng)激誘導(dǎo)的慢性內(nèi)臟痛覺過敏中的作用。
方法:①使用三種不同的應(yīng)激方法(強迫游泳、冷束縛、孤島)對6~8周齡SD雄性大鼠進行持續(xù)9天的異源性慢性應(yīng)激(HIS)從而誘導(dǎo)大鼠結(jié)直腸慢性痛覺過敏。運用腹壁撤回評分(AWR score)的方法評測腹腔注射不同的腎上腺素能
2、受體拮抗劑對HIS大鼠痛行為的影響。②在結(jié)直腸壁注射逆行標(biāo)記熒光素(DiI)來標(biāo)記結(jié)直腸特異性的背根神經(jīng)節(jié)(DRG)神經(jīng)元,運用全細胞膜片鉗的方法研究腎上腺素能受體拮抗劑對HIS模型大鼠結(jié)直腸相關(guān)DRG神經(jīng)元的興奮性及對電壓依賴的鉀離子通道特性的影響。③運用Western Blotting方法檢測對照組和HIS模型組大鼠結(jié)直腸肌及結(jié)直腸相關(guān)DRG中腎上腺素能β2受體表達情況。④運用Elisa的方法檢測對照組和HIS模型組大鼠血清中去甲腎
3、上腺素的濃度。
結(jié)果:⑴腹腔注射NE受體的拮抗劑發(fā)現(xiàn)腎上腺素能β受體非選擇性拮抗劑,而不是α受體拮抗劑,可以明顯翻轉(zhuǎn)由HIS誘導(dǎo)的大鼠結(jié)直腸痛覺過敏。進一步的研究發(fā)現(xiàn),腎上腺素能β2受體拮抗劑可以明顯翻轉(zhuǎn)由HIS誘導(dǎo)的大鼠結(jié)直腸痛覺過敏,而β1和β3受體拮抗劑對應(yīng)激導(dǎo)致的結(jié)直腸痛覺過敏沒有明顯作用。⑵全細胞膜片鉗記錄發(fā)現(xiàn),與生理鹽水組相比,腎上腺素能β2受體拮抗劑能明顯翻轉(zhuǎn)由HIS應(yīng)激誘導(dǎo)的大鼠結(jié)直腸相關(guān)DRG神經(jīng)元興奮性的升
4、高。⑶電壓鉗模式下記錄發(fā)現(xiàn),與生理鹽水組相比,腎上腺素能β受體拮抗劑能明顯翻轉(zhuǎn)由HIS應(yīng)激誘導(dǎo)的大鼠結(jié)直腸相關(guān)DRG神經(jīng)元鉀電流密度的降低。⑷行為學(xué)實驗發(fā)現(xiàn),腎上腺素能β2受體拮抗劑可以明顯翻轉(zhuǎn)NE鞘內(nèi)注射模擬的內(nèi)臟痛覺過敏,NE灌流DRG神經(jīng)元亦可以明顯提高其興奮性。⑸Elisa檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),大鼠血清中的NE濃度在HIS6h后明顯升高,在一周后恢復(fù)。WersternBlottin檢測發(fā)現(xiàn),在應(yīng)激前后大鼠結(jié)直腸肌和相關(guān)DRG中的β2受體
5、蛋白表達水平?jīng)]有變化。
結(jié)論:慢性異源性應(yīng)激可以引起大鼠血清中去甲腎上腺素濃度升高,可能激活了大鼠初級感覺神經(jīng)元上的腎上腺素能β2受體,從而升高了結(jié)直腸特異性DRG神經(jīng)元的興奮性進而產(chǎn)生內(nèi)臟痛覺過敏;延遲整流型鉀電流(IK)密度的降低可能參與了慢性異源性應(yīng)激導(dǎo)致的結(jié)直腸特異性DRG神經(jīng)元興奮性的增加。因此,本實驗研究在一定程度上揭示了功能性胃腸疾病如IBS病人慢性內(nèi)臟痛產(chǎn)生的分子機制,從而可能為慢性內(nèi)臟痛的治療提供更有效的治療
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