經(jīng)β2腎上腺素能受體介導(dǎo)影響THP-1源性巨噬細(xì)胞功能及意義的研究.pdf

1、目的：流行病學(xué)研究已取得廣泛證據(jù)，心理應(yīng)激是動脈粥樣硬化的危險因素。心理應(yīng)激可以使交感神經(jīng)的張力增加，引起下丘腦-垂體-腎上腺軸過度興奮刺激兒茶酚胺的產(chǎn)生。臨床病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)動脈粥樣斑塊內(nèi)有大量的單核-巨噬細(xì)胞侵潤，單核-巨噬細(xì)胞在動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，單核-巨噬細(xì)胞表面存在大量的β2腎上腺素能受體(β2-adrenergic receptor,β2-AR)。心理應(yīng)激產(chǎn)生的兒茶酚胺很可能作用于巨噬細(xì)胞β2-AR，引起單

2、核-巨噬細(xì)胞功能發(fā)生變化，對動脈粥樣斑塊穩(wěn)定性產(chǎn)生影響，導(dǎo)致臨床病情變化。因此，本課題以THP-1細(xì)胞為研究對象，利用佛波酯(Phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)誘導(dǎo)成巨噬細(xì)胞，再分別以β2-AR激動劑以及對β2-AR不同選擇性的β受體阻滯劑干預(yù)巨噬細(xì)胞，分別觀察β2-AR激動劑以及對β2-AR不同選擇性的β受體阻滯劑對巨噬細(xì)胞吞噬ox-LDL的能力和吞噬ox-LDL后的細(xì)胞存活率，以及釋放腫瘤壞死因

3、子-α(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)和白介素-10(Interleukin-10,IL-10)因子的相關(guān)功能的影響，探討經(jīng)β2-AR介導(dǎo)，β2-AR激動劑以及對β2-AR不同選擇性的β受體阻滯劑引起巨噬細(xì)胞功能的改變，可能對臨床動脈粥樣斑塊穩(wěn)定性產(chǎn)生的影響。
　　方法：(1)體外培養(yǎng)THP-1細(xì)胞，利用PMA誘導(dǎo) THP-1細(xì)胞分化形成巨噬細(xì)胞。實驗分為：空白對照組；ox-LDL組：50 m

4、g/Lox-LDL；實驗組：沙丁胺醇組(β2受體激動劑)藥物濃度為1μmol/L+50 mg/Lox-LDL、10μmol/L+50 mg/Lox-LDL、50μm ol/L+50 mg/Lox-LDL；美托洛爾組（高選擇性β1受體阻斷劑）藥物濃度1μmol/L+50 mg/Lox-LDL、10μmol/+50 mg/Lox-LDLl、50μmol/L+50 mg/Lox-LDL；普萘洛爾組(非選擇性β1+β2受體阻斷劑)藥物濃度0.1

5、μmol/L+50 mg/Lox-LDL、1μmol/L+50 mg/Lox-LDL、10μmol/L+50 mg/Lox-LDL；ICI118551組(β2受體阻斷劑)1μmol/L+50 mg/Lox-LDL、10μmol/L+50 mg/Lox-LDL、50μmol/L+50 mg/Lox-LDL；(2）實驗組各組備雙份，其中1份在加藥1小時后，以50 mg/Lox-LDL孵育24小時。采用MTT檢測法檢測細(xì)胞的存活率，采用油紅O

6、染色法檢測巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)的能力；(3)實驗組各組的另1份，在加藥1小時后以脂多糖10μg/ml與50 mg/Lox-LDL共孵育24小時。通過酶聯(lián)免疫吸附試驗法(enzyme-linked immunosorbent assay method, ELISA)，檢測細(xì)胞上清中TNF-α和IL-10的含量。
　　結(jié)果：(1)MTT檢測法顯示：對照組與ox-LDL組相比，ox-LDL組存活率明顯下降(p＜0.01)；實驗組沙丁胺醇各濃

7、度組與ox-LDL組相比，沙丁胺醇1μmol/L組沒有統(tǒng)計學(xué)差異，而10μmol/L濃度組和50μmol/L濃度組均降低巨噬細(xì)胞的存活率，呈濃度依賴性降低(p＜0.05)；美托洛爾各濃度組與ox-LDL組相比，美托洛爾1μmol/L組無統(tǒng)計學(xué)差異，美托洛爾10μmol/和50μmol/L組，均提高巨噬細(xì)胞存活率，呈濃度依賴性提高(p＜0.05)；普萘洛爾各濃度組與ox-LDL組相比均提高巨噬細(xì)胞存活率，并呈濃度依賴性的提高(p＜0.05

8、)；ICI118551組各濃度組與 ox-LDL組比，均提高巨噬細(xì)胞存活率，并呈濃度依賴性(p＜0.05)。
　　(2)油紅O染色顯示：與ox-LDL組相比，實驗組沙丁胺醇各濃度組與ox-LDL組相比，沙丁胺醇1μmol/L組無統(tǒng)計學(xué)差異，沙丁胺醇10μmol/L組和50μmol/L組均增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬ox-LDL能力，并呈濃度依賴性增強(qiáng)(p＜0.05)；美托洛爾各濃度組與ox-LDL組相比，美托洛爾1μmol/L組沒有統(tǒng)計學(xué)差異

9、，美托洛爾10μmol/L組和50μmol/L組，減弱巨噬細(xì)胞吞噬ox-LDL，并呈濃度依賴性減弱(p＜0.05)；普萘洛爾各濃度組與ox-LDL組相比，均減弱巨噬細(xì)胞吞噬ox-LDL能力，并呈濃度依賴性減弱(p＜0.05)；ICI118551組各濃度組與ox-LDL組比，均減弱巨噬細(xì)胞吞噬ox-LDL的能力，并呈濃度依賴性減弱(p＜0.05)。
　　(3)ELISA結(jié)果顯示：實驗組沙丁胺醇各濃度組與ox-LDL組相比，呈濃度依賴

10、性降低巨噬細(xì)胞分泌TNF-α，促進(jìn)IL-10的分泌(＜0.05)；美托洛爾各濃度組與ox-LDL組對比，美托洛爾組1μmol/L對巨噬細(xì)胞分泌TNF-α和IL-10，無統(tǒng)計學(xué)差異，美托洛爾10μmol/L組和50μmol/L組呈濃度依賴性促進(jìn)巨噬細(xì)胞TNF-α分泌，降低IL-10的分泌(p＜0.05)；普萘洛爾各濃度組與ox-LDL組相比，均促進(jìn)巨噬細(xì)胞TNF-α分泌，降低I L-10的分泌，并呈濃度依賴性的特點(p＜0.05)；ICI

11、118551組各濃度組與ox-LDL組相比均促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌TNF-α，降低IL-10的分泌，并呈濃度依賴性的特點(p＜0.05)。
　　結(jié)論：(1)β2-AR激動劑能降低巨噬細(xì)胞的存活率，促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬ox-LDL的能力，降低巨噬細(xì)胞TNF-α分泌，而促進(jìn)IL-10的分泌水平；β2-AR阻斷劑能提高巨噬細(xì)胞存活率，則減弱巨噬細(xì)胞吞噬 ox-LDL的能力，促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌 TNF-α分泌，降低IL-10的分泌水平。