抗α1-腎上腺素能受體短肽抗體功能效應的研究.pdf

1、第一部分、抗α1A-腎上腺素能受體短肽抗體的功能研究
　　 目的：α1A-腎上腺素能受體是對血壓維持和調節(jié)起著主導作用的α1-腎上腺素能受體亞型，可能是降壓靶點。然而，針對此亞型高度選擇性的拮抗劑至今還缺乏。我們旨在分析抗α1A-腎上腺素能受體短肽的特異性抗體的功能，為高血壓治療提供新策。
　　 方法和結果：我們篩選出α1A-腎上腺素能受體胞外環(huán)7-8個氨基酸短肽CP-7 （位于胞外第二環(huán)肽）以及CPE-8 （位于胞外第

2、三環(huán)）。上述短肽與KLH 偶聯后免疫新西蘭大白兔以及自發(fā)性高血壓大鼠。前者血清經過50％飽和硫酸銨沉淀以及抗原肽段親和純化濃縮后得到特異性抗肽抗體，分別命名為Anti-CP-7以及Anti-CPE-8。蛋白免疫印跡以及細胞免疫熒光證實此兩個抗體均能與α1A-腎上腺素能受體特異性結合，與α1B-以及α1D-腎上腺素能受體不存在交叉反應性。體外功能分析證實僅有Anti-CP-7 抗體可以顯著性抑制苯腎上腺素刺激α1A-腎上腺素能受體引起的胞

3、內鈣升高，蛋白激酶C 活化，細胞外信號蛋白激酶磷酸化，以及抑制基礎和苯腎上腺素刺激狀態(tài)下的心肌細胞搏動。與單獨KLH 免疫組相比，CP-7-KLH 免疫組在免疫過程的某個階段可以顯著抑制自發(fā)性高血壓大鼠血壓升高，并與Anti-CP-7 抗體滴度具有相關性。上述體內外效應在CPE-8表位免疫組中均不顯著。
　　 結論：我們研究證實Anti-CP-7 能在體內外抑制α1A-腎上腺素能受體活性。我們的實驗方法可能成為缺乏特異性拮抗劑的

4、α1A-腎上腺素能受體或者其他G 蛋白偶聯受體的新策略。CP-7表位可能是治療高血壓治療的新靶點。
　　 第二部分、抗α1D-腎上腺素能受體短肽抗體的功能研究
　　 目的：α1D-腎上腺素能受體是α1-腎上腺素能受體一種亞型，研究證實其參與維持和調節(jié)全身血壓，活性增高可以導致高血壓的發(fā)生和發(fā)展，可能是高血壓治療新靶點。然而其特異性拮抗劑目前還缺乏。我們旨在功能分析抗大鼠α1D-腎上腺素能受體胞外第二環(huán)短肽的特異性抗肽抗體

5、，提供高血壓治療新策略。
　　 方法和結果：大鼠α1D-腎上腺素能受體胞外第二環(huán)短肽表位（CF-8）與KLH 偶聯免疫新西蘭大白兔以及自發(fā)性高血壓大鼠。兔血清經過50％飽和硫酸銨沉淀以及抗原親和純化純化出特異性抗肽抗體（Anti-CF-8），蛋白免疫印跡以及細胞免疫熒光證實Anti-CF-8 可以特異性結合大鼠主動脈血管環(huán)以及主動脈血管平滑肌細胞上α1D-腎上腺素能受體；體外功能研究證實Anti-CF-8 可以抑制苯腎上腺素刺激

6、α1D-腎上腺素能受體引起的蛋白激酶C （PKC）移位，細胞外信號蛋白激酶(ERK)磷酸化，以及細胞質鈣離子濃度的瞬時升高；可以抑制苯腎上腺素刺激后主動脈血管環(huán)張力增高。自發(fā)性高血壓大鼠動物模型被用來進一步評價Anti-CF-8在體效應，與單獨KLH免疫組相比，CF-8-KLH 免疫組整個免疫過程并沒有顯示出顯著降壓效果，其免疫后Anti-CF-8 抗體滴度最高達到1:3200。
　　 結論：我們成功制備了一個可以體外特異性抑制