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文檔簡介
1、目的:實驗室以前的研究已從功能上說明淋巴細胞存在α一和β一腎上腺素受體,這些受體參與調節(jié)淋巴細胞的功能。但目前還沒有直接的證據(jù)說明淋巴細胞表達和合成α~腎上腺素受體(a-AR),且α一亞型腎上腺素受體在調節(jié)淋巴細胞功能中的介導作用目前還知之甚少。因此,本研究首先從分子水平揭示T淋巴細胞表達兩種亞型a-AR一一αl和ct2-ARmRNA的現(xiàn)象,然后探討這些受體在調節(jié)T淋巴細胞功能中的介導作用及其相應的細胞內信號轉導機制,從而為神經(jīng)一內分泌
2、一免疫調節(jié)網(wǎng)絡提供更多的實驗依據(jù)。 方法:取大鼠腸系膜淋巴結細胞,用尼龍毛柱粘附法分離和純化T淋巴細胞,應用E花環(huán)法檢測T細胞的分離純度。用逆轉錄一聚合酶鏈反應(RT-PCR)法檢測靜息T細胞和活化T細胞的a-ARmRNA的表達。用α1-AR激動劑苯腎上腺素、a2-AR激動劑可樂定、a2-AR拮抗劑育亨賓、磷脂酶C(PLC)抑制劑U-73122和蛋白激酶C(PKC)抑制劑Chelerythrine分別作用于淋巴細胞,然后應用噻唑
3、蘭(MTT)比色法檢測這些淋巴細胞對刀豆蛋白A(ConA)刺激的增殖反應;并應用酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)法測定用ConA刺激的淋巴細胞培養(yǎng)物上清液中白介素一4(IL-4)的水平。 結果:經(jīng)過對腸系膜淋巴結細胞的分離和純化,獲得的T細胞的純度明顯高于未分離和純化的淋巴細胞,但分離純化后的T細胞,其活性仍然保持與分離前T細胞的活性相似。這些純化的T細胞在靜息狀態(tài)時可表達al-ARmRNA和a2-ARmRNA,但T細胞用ConA
4、刺激后,表達αrARmRNA和a2-ARmRNA都明顯高于靜息的淋巴細胞。本研究所用的4個濃度的al-AR激動劑苯腎上腺素(10-9~10-6mol/L)均沒有顯著影響ConA誘導的淋巴細胞增殖反應;而同樣4個濃度的a2-AR激動劑可樂定(10-9~10‘6mol/n)均可明顯抑制ConA誘導的淋巴細胞增殖反應,但各濃度之間沒有顯著差異。不同濃度的cz2-AR拮抗劑育亨賓(10-10~10。5mol/L)都能阻斷可樂定(10-9mol/
5、L或10-6mol/L)的抑制T細胞增殖的作用。同樣,不同濃度的PLC抑制劑U-73122(10-10~10。7mol/L)和PKC抑制劑chelerythrine(10-10~10‘7mol/L)都可阻斷可樂定(10’9mol/L或10。6mol/L)的抑制T細胞增殖的作用。此外,可樂定(10-9mol/L)可抑制ConA誘導的T細胞產(chǎn)生和釋放細胞因子IL-4,而育亨賓(10-9mol/L)、U-73122(10-9mol/L)和ch
6、elerythrine(10。9mol/L)均能阻斷可樂定的抑制IL-4產(chǎn)生和釋放的作用。 結論:T淋巴細胞能表達兩種α亞型腎上腺素受體一一α1’AR和僅2一AR,并且活化的T細胞表達α1.AR和僅2一AR均增強。αl—AR可能不參與調節(jié)T淋巴細胞的增殖反應;而α2一AR可抑制T淋巴細胞的功能,這種作用可能經(jīng)淋巴細胞內的PLC和PKC路徑實現(xiàn)。上述結果提示,在機體內,交感神經(jīng)和腎上腺髓質所釋放的去甲腎上腺素和腎上腺素有可能通過α
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