中藥藍(lán)玉簪龍膽燈臺(tái)抗病毒實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　1.研究藍(lán)玉簪龍膽，燈臺(tái)兩種中藥對(duì)呼吸道合胞病毒株（RSV-LONG株）感染人喉癌（Hep-2）細(xì)胞引起的細(xì)胞病變（CPE）的作用，分析其可能的抗RSV機(jī)制。
　　2.研究藍(lán)玉簪龍膽，燈臺(tái)兩種中藥對(duì)RSV引起的小鼠肺部感染的治療效果，分析其可能的抗炎、抗病毒作用。
　　方法：
　　1.體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：以Hep-2為宿主細(xì)胞，通過光鏡下觀察CPE法和四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法，測(cè)定藍(lán)玉簪龍膽，燈臺(tái)對(duì)H

2、ep-2細(xì)胞的毒性作用；檢測(cè)二種中藥不同濃度下對(duì)RSV直接殺傷作用、病變抑制作用以及阻斷作用，確認(rèn)藥物的有效作用方式，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組及病毒對(duì)照組。
　　2.體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：通過對(duì)昆明種小鼠清醒狀態(tài)下滴鼻感染，建立RSV感染小鼠模型；分別給與藍(lán)玉簪龍膽水煎液、燈臺(tái)水煎液灌胃治療，每天一次，療程7天。于最后一次給藥12小時(shí)后處死小鼠，取出肺組織進(jìn)行切片HE染色和RSV直接免疫熒光染色，觀察建模成功的小鼠病毒性肺炎進(jìn)展程度以及它們對(duì)病毒

3、性肺炎的治療情況。同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組及病毒對(duì)照組。
　　結(jié)果：
　　1.藍(lán)玉簪龍膽細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，各類藥物無毒濃度界值分別為：藍(lán)玉簪龍膽水煎液（6.25mg/ml）、正丁醇提取液(1700mg/ml)、乙酸乙酯提取液(19.1mg/ml)、氯仿提取液(7.5mg/ml)，燈臺(tái)水煎液（12.5mg/ml）。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)顯示：與病毒對(duì)照組相比，藍(lán)玉簪龍膽水煎液、藍(lán)玉簪正丁醇、乙酸乙酯、氯仿提取液在各自無毒濃度稀釋32倍以內(nèi)均具有抑制RSV病

4、變效果，且呈劑量依賴關(guān)系。藍(lán)玉簪各提取液不同稀釋倍數(shù)在直接殺傷及阻斷入侵兩方面效果不明確。
　　2.藍(lán)玉簪龍膽動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：小鼠肺組織病理切片HE染色顯示：空白對(duì)照組小鼠絕大部分肺泡無炎性積液浸潤(rùn)，肺泡間隔不寬、無充血、水腫，無炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。病毒對(duì)照組可見明顯的間質(zhì)性肺炎病變，表現(xiàn)為支氣管、細(xì)支氣管壁、肺泡壁及肺間質(zhì)充血、水腫，并伴有大量淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤(rùn)；肺泡內(nèi)大量炎性漿液滲出，藍(lán)玉簪水煎液治療組肺泡內(nèi)炎性漿液滲出及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)

5、明顯改善。肺間質(zhì)充血、水腫明顯減輕，其內(nèi)淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞浸潤(rùn)明顯較少。直接免疫熒光染色顯示：對(duì)照組可見肺組織肺泡上皮內(nèi)存在明亮的熒光顆粒，空白組可見可疑的非特異染色熒光存在，藍(lán)玉簪水煎液組可見RSV顆粒數(shù)量及亮度均明顯下降，呈微弱的可疑熒光。
　　3.燈臺(tái)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：燈臺(tái)水煎液在無毒濃度稀釋32倍以下在病變抑制、直接殺傷、阻斷入侵三種方式上均具有一定抗RSV作用。
　　4.燈臺(tái)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：小鼠肺組織病理切片HE染色顯示：空白對(duì)

6、照組小鼠肺泡內(nèi)無炎性漿液浸潤(rùn)，肺泡間隔不寬，無充血、水腫，其內(nèi)未見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。病毒對(duì)照組可觀察到大量肺泡內(nèi)炎性漿液滲出，肺泡間隔明顯增寬、水腫、其內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。燈臺(tái)治療組可見炎性漿液滲出已大大減輕，肺泡間隔不寬，其內(nèi)未見明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。直接免疫熒光顯示，空白對(duì)照組無特異性熒光顆粒，病毒對(duì)照組內(nèi)可見大量熒光顆粒分布在肺泡上皮。燈臺(tái)治療組相比對(duì)照組，熒光的亮度及顆粒數(shù)量均大大降低，呈可疑熒光。證實(shí)了燈臺(tái)可以抑制RSV在小鼠肺組織內(nèi)