DADS對(duì)SW480細(xì)胞系生物學(xué)行為及蛋白質(zhì)表達(dá)譜的影響.pdf

1、第一部分二烯丙基二硫?qū)θ私Y(jié)腸癌細(xì)胞系生物學(xué)行為的影響 目的：探討二烯丙基二硫（DADS）對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞系（SW480）生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制。 方法：以SW480細(xì)胞系為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象,通過MTT法測定DADS對(duì)SW480細(xì)胞的生長抑制效應(yīng),采用HE染色及流式細(xì)胞儀檢測藥物作用前后細(xì)胞形態(tài)學(xué)及細(xì)胞周期分布等方面的改變。 結(jié)果：MTT法測定結(jié)果顯示，DADS對(duì)SW480細(xì)胞具有明顯的生長抑制作用，DADS濃度由30

2、μg/ml增加至70μg/ml時(shí)，SW480細(xì)胞的生長抑制率由23％提高到66％，呈劑量-效應(yīng)依賴關(guān)系；形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)DADS誘導(dǎo)SW480細(xì)胞呈現(xiàn)出異型性降低，核質(zhì)比下降等細(xì)胞成熟分化的特征；表明SW480細(xì)胞在DADS作用后，使瘤細(xì)胞異型性下降，并使部分瘤細(xì)胞向成熟細(xì)胞方向分化。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示：隨著DADS處理濃度加大，瘤細(xì)胞群體中S期細(xì)胞數(shù)減少，細(xì)胞阻滯在G2/M期的細(xì)胞數(shù)目增多，亞二倍體峰逐漸增高。 結(jié)論：

3、 1.DADS對(duì)SW480細(xì)胞系具有明顯的增殖抑制作用，且呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)依賴關(guān)系。 2.DADS使SW480細(xì)胞阻滯在G2/M期。 第二部分DADS對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞系蛋白質(zhì)表達(dá)譜的影響 目的：近年來，蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于腫瘤研究領(lǐng)域，但用于結(jié)腸癌的研究較少報(bào)導(dǎo)。本課題旨在研究DADS抑制SW480細(xì)胞系生長，探討DADS誘導(dǎo)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞蛋白質(zhì)組差異表達(dá)的相關(guān)分子機(jī)制。 方法：采用

4、蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)，如二維電泳、圖像分析、質(zhì)譜技術(shù)等方法，觀察DADS對(duì)SW480細(xì)胞系的生長抑制以及蛋白質(zhì)組的差異表達(dá)。用固相pH梯度雙向凝膠電泳，分離SW480細(xì)胞和DADS處理的SW480細(xì)胞總蛋白質(zhì)；用銀染和考馬斯亮藍(lán)染色對(duì)凝膠上的蛋白質(zhì)進(jìn)行可視化檢測；經(jīng)過染色后的凝膠用PDQuest軟件進(jìn)行分析，切取部分重復(fù)性好、邊界清晰的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)經(jīng)膠內(nèi)原位酶解，用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）測定肽質(zhì)量指紋

5、圖（PMF），將所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行生物信息學(xué)分析處理。 結(jié)果：在相同條件下，對(duì)DADS處理前后SW480細(xì)胞兩種樣品的總蛋白質(zhì)進(jìn)行雙向電泳，獲得重復(fù)性較好的雙向電泳銀染圖譜,經(jīng)掃描成像及PDQuest軟件分析，在相同條件下識(shí)別的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)分別為對(duì)照組592±36個(gè)，處理組623±24個(gè),其平均匹配率分別為92％和98％。兩組平均膠比較結(jié)果顯示，有167個(gè)匹配的蛋白質(zhì)點(diǎn)存在表達(dá)量上的差異，其中與對(duì)照組相比，處理組蛋白質(zhì)表達(dá)量上調(diào)的有

6、98個(gè)，表達(dá)量下調(diào)的有69個(gè)。切割部分邊界清晰、差異表達(dá)的銀染蛋白質(zhì)點(diǎn),用TPCK處理的胰酶酶解后上質(zhì)譜分析,獲得相關(guān)蛋白的肽質(zhì)量指紋圖譜,經(jīng)MS-FIT軟件上相關(guān)數(shù)據(jù)庫查詢，初步鑒定出其中的20種差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。發(fā)現(xiàn)了一些與細(xì)胞骨架、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、細(xì)胞免疫及腫瘤轉(zhuǎn)移等相關(guān)的蛋白質(zhì)。其中，有12種蛋白質(zhì)在處理后的SW480細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)：細(xì)胞角蛋白18、IgE依賴性組胺釋放因子、H+轉(zhuǎn)運(yùn)-ATP酶、細(xì)胞視黃醇結(jié)合蛋白I

7、（CRBP-I）、細(xì)胞角蛋白1、肌球蛋白輕鏈、泛肽、熱休克蛋白64（HSP64）、假設(shè)蛋白、鳥苷酸環(huán)化酶活化蛋白（GCAPs）、催產(chǎn)素酶/胰島素敏感氨基肽酶和Sequence 9 from Patent WO0164904；有8種蛋白質(zhì)在處理后的SW480細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)：細(xì)胞角蛋白19、肌動(dòng)蛋白解聚因子、V-1蛋白、果糖二磷酸醛縮酶（FBA）、FK506結(jié)合蛋白（FKBP）、成帽蛋白、硫氧還蛋白過氧化物酶和敏感性轉(zhuǎn)化蛋白。這些蛋白質(zhì)可能

8、在DADS抑制SW480細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)其向成熟方向分化中起作用。 結(jié)論： 1.DADS可能是通過鳥苷酸環(huán)化酶活化蛋白、肌球蛋白輕鏈表達(dá)上調(diào)及果糖二磷酸醛縮酶、FK506結(jié)合蛋白表達(dá)下調(diào)，抑制SW480細(xì)胞增殖；通過泛肽的表達(dá)上調(diào)，使SW480細(xì)胞發(fā)生G2/M期阻滯。 2.DADS可通過細(xì)胞視黃醇結(jié)合蛋白I的表達(dá)上調(diào)，誘導(dǎo)SW480細(xì)胞分化；通過細(xì)胞角蛋白18的表達(dá)上調(diào)及硫氧還蛋白過氧化物酶的表達(dá)下調(diào)，誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋