中華絨螯蟹蛻皮抑制激素單抗的制備及其在眼柄視上神經(jīng)節(jié)中的表達(dá)特征.pdf

1、中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)，俗稱河蟹，屬于節(jié)肢動(dòng)物門，甲殼綱，十足目，是我國(guó)五大經(jīng)濟(jì)蟹類之一。對(duì)甲殼動(dòng)物來(lái)說(shuō)，只有通過(guò)不斷的蛻皮才能完成其生長(zhǎng)發(fā)育，而蛻皮是一個(gè)非常復(fù)雜的生理過(guò)程，不僅受到神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)，而且也受到內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響。中華絨螯蟹蛻皮抑制激素(molt inhibiting hormone，MIH)屬于神經(jīng)多肽類激素，在甲殼動(dòng)物蛻皮過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，與蛻皮激素(molt hormone，MH)共

2、同調(diào)節(jié)其蛻皮過(guò)程。研究MIH不但可以更深入了解它對(duì)蛻皮機(jī)制的影響，并且可以對(duì)生產(chǎn)實(shí)踐提出理論性的指導(dǎo)。
　　本實(shí)驗(yàn)利用基因重組技術(shù)成功構(gòu)建了MIH原核表達(dá)載體，并在大腸桿菌BL21(DE3)中進(jìn)行了大量表達(dá)。通過(guò)對(duì)大量表達(dá)的菌體進(jìn)行超聲破碎，并分別純化離心后的上清和包涵體沉淀，發(fā)現(xiàn)原核表達(dá)的MIH重組蛋白以包涵體形式存在；用8M尿素溶解包涵體，并利用鎳柱親和層析法進(jìn)行純化，然后用該蛋白進(jìn)行小鼠免疫，免疫完成后應(yīng)用間接ELISA法檢

3、測(cè)抗血清效價(jià)達(dá)到1:10000以上，說(shuō)明該免疫的小鼠適合用于細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)。
　　細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用間接ELISA方法進(jìn)行陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞檢測(cè)，共檢測(cè)到13個(gè)陽(yáng)性孔，其中6個(gè)強(qiáng)陽(yáng)性孔；利用有限稀釋法進(jìn)行亞克隆，通過(guò)3次亞克隆最終篩選到1株穩(wěn)定分泌抗體的單克隆雜交瘤細(xì)胞株，間接ELISA法檢測(cè)效價(jià)達(dá)到了1:51200；用該株細(xì)胞誘生小鼠腹水大量制備單克隆抗體，得到的單克隆抗體效價(jià)達(dá)到了1:102400，濃度為2.8 mg/mL。Wes