實驗室條件下中華絨螯蟹成蟹的蛻殼、生長觀察與蛻皮激素受體基因的克隆、表達分析.pdf

1、中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）肉味鮮美，營養(yǎng)豐富，是我國特有的一種重要水產(chǎn)經(jīng)濟生物，在水產(chǎn)業(yè)中具有獨特的地位。本文采用養(yǎng)殖生物學(xué)、分子生物學(xué)等研究手段，在實驗室條件下，對中華絨螯蟹在成蟹階段的蛻殼與生長進行了觀察、研究了水草和不同飼養(yǎng)方式對其生長的影響，并對其蛻皮激素受體（ecdysone receptor，EcR）基因進行了克隆和表達分析，結(jié)果如下。
　　一、實驗室條件下中華絨螯蟹成蟹階段的蛻殼與生長觀察

2、r>　　本部分在實驗室條件下，進行了中華絨螯蟹成蟹階段（200d）的個體蛻殼與生長觀察。在觀察的4次蛻殼中，雄蟹每次蛻殼后的體重、殼長和殼寬均高于雌蟹，但從第3次蛻殼開始，雌雄間才呈現(xiàn)出顯著的生長差異(P＜0.05)。第1－4次的平均蛻殼間期分別為37、38、29和41 d。在前兩次蛻殼，其蛻殼后的生長變異系數(shù)較大，而在后兩次蛻殼，其蛻殼后的生長變異系數(shù)相對較小。起始體重對每次蛻殼后體重有顯著影響(P＜0.05)，第3次蛻殼后的體重與其

3、他次數(shù)蛻殼后體重呈顯著相關(guān)(P＜0.05)。研究還發(fā)現(xiàn)，殼長、殼寬與生長水溫有顯著的相關(guān)性(P＜0.05)，體重與生長水溫的相關(guān)性略顯著(r=0.917～0.923，0.05＜P＜0.10)。以上研究結(jié)果表明：河蟹成蟹階段在第3次蛻殼的增長率最高，對生長影響較大，應(yīng)注意此階段的飼養(yǎng)與管理；同時，在生產(chǎn)上為提高成蟹的養(yǎng)成規(guī)格應(yīng)選取規(guī)格較大的蟹種。
　　二、實驗室條件下不同飼養(yǎng)方式對中華絨螯蟹成蟹的蛻殼與生長影響
　　在實驗室條

4、件下，研究了不同飼養(yǎng)方式（有水草、無水草；雌雄單養(yǎng)和雌雄混養(yǎng)）對中華絨螯蟹成蟹階段的蛻殼與生長影響。發(fā)現(xiàn)：有水草飼養(yǎng)環(huán)境下的體重極顯著高于無水草飼養(yǎng)環(huán)境（P<0.01），三種飼養(yǎng)方式（雌蟹單養(yǎng)、雄蟹單養(yǎng)和雌雄混養(yǎng)）間的河蟹體重增長差異極顯著（P<0.01）；不同蛻殼次數(shù)間體重、殼長和殼寬的差異極顯著(P＜0.01)；飼養(yǎng)方式與水草、飼養(yǎng)方式與蛻殼次數(shù)、水草與蛻殼次數(shù)對河蟹體重增長的交互作用也極顯著（P<0.01）；同時，飼養(yǎng)方式、水草和

5、蛻殼次數(shù)三者對體重增長的交互作用也極顯著（P<0.01），但對殼長、殼寬和肥滿度的交互作用不顯著（P>0.05）。以上研究結(jié)果表明：有水草的環(huán)境下河蟹的蛻殼生長顯著好于無水草的環(huán)境；雄蟹單養(yǎng)的飼養(yǎng)模式最不利于河蟹的生長。
　　三、實驗室條件下中華絨螯蟹蛻皮激素受體基因的克隆和表達分析
　　中華絨螯蟹的蛻殼與生長過程是由蛻皮激素和蛻皮抑制激素相互拮抗而調(diào)節(jié)的，其中，蛻皮激素是以核受體超家族中的蛻皮激素受體（ecdysone r

6、eceptor，EcR）和維甲酸X受體（retinoid X receptor，RXR）這兩個基因構(gòu)成的轉(zhuǎn)錄因子為媒介從而發(fā)揮作用的。本部分通過RT-PCR和RACE技術(shù)獲得總長度為2056bp的中華絨螯蟹蛻皮激素受體（EcR）基因的cDNA序列（GenBank登錄號：KC823045）；該基因包括144bp的5’-UTR、738bp的3’-UTR和1173bp的開放閱讀框（編碼391個氨基酸）。氨基酸序列與其它蟹類的同源性高達86％-