SUMO-1基因在肝癌診斷和治療中的價值研究.pdf

1、背景:SLIMO(small ubiquitin-like modifier)基因是泛素樣基因家族中的一員,主要參與蛋白質翻譯后多種功能的修飾。和泛素(ubiquitin)結合底物蛋白后引起底物蛋白降解的作用不同,SLIMO蛋白和相應的底物蛋白結合后不會引起底物蛋白的降解,而是調節(jié)底物蛋白的功能,在轉錄、DNA修復、核質轉運、染色體分離及染色體代謝等方面發(fā)揮重要調控作用。已發(fā)現(xiàn)越來越多的和癌癥相關的蛋白都存在SLIMO-1修飾。增殖細胞

2、核抗原(proliferating cell nuclearantigen,PCNA)、p53、雌激素受體、NF-kappa B信號調節(jié)以及端粒酶活性維持都離不開SUMO修飾作用的調節(jié)。SUMO-1修飾可抑制p53基因的活性,促使癌癥的發(fā)生、發(fā)展和轉移。抑癌基因p53在細胞的發(fā)生、分化、凋亡等方面發(fā)揮重要的作用,如果p53基因活性被抑制,細胞就容易發(fā)生癌變。P53基因缺失可引起多種癌癥的發(fā)生,但如失活的p53基因重新被激活,就可能使腫瘤

3、的生長受到抑制甚至消亡。SUMO-1蛋白和癌癥的發(fā)生、發(fā)展關系密切。
　　 目的:鑒于SUMO-1基因在癌癥發(fā)生發(fā)展中的重要作用,本論文旨在研究SUMO-1基因在肝細胞性肝癌中的表達水平,并觀察沉默SUMO-1基因表達后對肝癌細胞增殖、凋亡及細胞周期的影響,并探討導致肝癌細胞生物學行為變化的機制,評價SUMO-1基因在肝癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及潛在的診斷和治療肝癌中的應用價值。
　　 方法：采用RT-PCR、Western

4、 blot方法在mRNA及蛋白水平檢測肝癌傳代細胞、臨床肝細胞性肝癌及癌旁肝組織標本中SUMO-1基因的表達水平并比較這些組織中SUMO-1基因表達的差異。采用RT-PCR.的方法檢測外科切除的肝癌、癌旁肝組織、肝血管瘤及肝局灶性結節(jié)性增生中SUMO-1基因mRNA的表達水平并比較肝癌和癌旁肝組織之間、甲胎蛋白陰性和陽性的肝細胞性肝癌之間、肝良惡性腫瘤之間的SUMO-1基因mRNA表達水平的差異。將人工合成的針對SUMO-1基因的siR

5、NA片段轉染體外培養(yǎng)的肝癌細胞SMMC-7721,采用RT-PCR、Westernblot方法在mRNA及蛋白水平檢測siRNA沉默肝癌細胞中SLIMO.1基因的效果。通過MTr、流式細胞儀及TUNEL試驗檢測SUMO-1基因沉默后對肝癌細胞生長的影響。采用RT-PCR、Westem blot方法檢測SUMO-1表達沉默后Bcl-2、c-myc在mRNA及蛋白水平的變化。
　　 結果：在mRNA及蛋白水平,SUMO-1基因在肝癌

6、傳代細胞SMMC-7721、Hep3B、HepG2及肝癌標本中均明顯高表達,而癌旁肝組織中SUMO-1基因表達明顯低,肝癌組織和癌旁肝組織中SUMO-1表達有明顯的差異(P＜0.001)。SUMO-1基因mRNA在肝癌及癌旁肝組織中都有表達,但在肝癌中的表達水平顯著高于癌旁肝組織;在不同AFP水平的肝細胞性肝癌患者中SUMO-1基因mRNA均高表達,差別沒有統(tǒng)計學意義;在肝血管瘤及肝局灶性結節(jié)性增生中SUMO-1基因mRNA也有表達,但

7、表達水平明顯低于肝癌。人工合成的針對SUMO-1基因的siRNA片段能顯著地抑制SMMC-7721中SUMO-1基因的表達,48 h抑制率可達到73.43％。MTT結果顯示肝癌細胞SMMC-772l轉染SUMO-1 siRNA后生長明顯受到抑制,流式細胞儀檢測G2期細胞明顯增加,但TUNEL試驗未發(fā)現(xiàn)凋亡細胞。轉染SUMO-1 siRNA后SMMC.7721中Bcl-2、c-myc及α-tubulin的表達均明顯的下調。
　　

8、結論：SUMO-1基因在肝癌中高表達,SUMO-1可能為肝癌診斷和治療中的一個潛在的靶點。在不同AFP水平的肝癌中,SUMO-1基因mRNA均明顯高表達,而在癌旁肝組織及肝良性腫瘤中表達較低,SUMO-1基因mRNA可作為診斷肝癌的一個重要的標志物。SUMO-1 siRigA沉默肝癌細胞SMMC-7721中SUMO-1基因效果良好,SUMO-1基因沉默后SMMC-7721生長明顯受到抑制,Bcl-2和c-myc表達下調,說明SUMO-1