Salusin-α基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及在HEK293細(xì)胞中的表達(dá).pdf

1、目的：研究增強(qiáng)型綠色熒光蛋白真核表達(dá)載體Salusin-a（pEGFP-Salusin-a）的構(gòu)建及在人胚胎腎細(xì)胞系293細(xì)胞（HEK293）中的表達(dá)。并探討冠心病患者血漿Salusin-a水平與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化之間的關(guān)系。
　　 方法：連續(xù)收集冠狀動(dòng)脈造影證實(shí)的冠心病患者92例為研究對(duì)象，按臨床表現(xiàn)分為穩(wěn)定型心絞痛(SA)組和急性冠脈綜合癥(ACS)組；分別測(cè)定人血漿Salusin-a水平并進(jìn)行Genisini評(píng)分，分析Sal

2、usin-a與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化之間的關(guān)系。提取人單核細(xì)胞系THP-1細(xì)胞Salusin-a的mRNA，逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）擴(kuò)增Salusin-a基因，克隆入pEGFP-N3載體，雙酶切、菌落PCR及測(cè)序鑒定pEGFP-Salusin-a質(zhì)粒。用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染pEGFP-Salusin-a入HEK293細(xì)胞，分為轉(zhuǎn)染細(xì)胞組，質(zhì)粒對(duì)照組和空白對(duì)照組檢測(cè)，分析各組熒光蛋白和Salusin-a基因的表達(dá)。
　　 結(jié)果：冠心病患

3、者中血漿Salusin-a的水平明顯比健康對(duì)照組低，且Salusin-a與代表冠狀動(dòng)脈病變程度的Gensini評(píng)分呈負(fù)相關(guān)。成功構(gòu)建pEGFP-Salusin-a質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)染HEK293，細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率86％，轉(zhuǎn)染細(xì)胞組和質(zhì)粒對(duì)照組綠色熒光蛋白的表達(dá)明顯高于空白對(duì)照組，（p<0.05）；轉(zhuǎn)染細(xì)胞組和質(zhì)粒對(duì)照組Salusin-a mRNA的表達(dá)高于空白對(duì)照組，（p<0.05）。
　　 結(jié)論：冠心病患者血漿Salusin-a水平顯著降