次級(jí)淋巴組織趨化因子真核表達(dá)及抗宮頸癌作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：構(gòu)建次級(jí)淋巴組織趨化因子[SLC]的真核表達(dá)載體pcDNA3.1(-)-SLC，表達(dá)制備SLC，進(jìn)而研究該質(zhì)粒在小鼠抗宮頸癌免疫中的作用。 方法：限制性內(nèi)切酶EcoRI,BamHI 將SLC 片段從pSG5-SLC 上酶切下來(lái)，用連接酶將其重組到pcDNA3.1(-)，構(gòu)建了pcDNA3.1(-)-SLC 真核表達(dá)載體。在體外用電穿孔的方法將pcDNA3.1(-)-SLC 轉(zhuǎn)入到人宮頸癌細(xì)胞Hela 中，培養(yǎng)、分泌表達(dá)SL

2、C于培養(yǎng)液中，用westernblot 鑒定。向BALB/C 小鼠右側(cè)腋下瘤體中多次分別注入不同濃度的重組SLC 質(zhì)粒，通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)小鼠血液、脾臟中的免疫細(xì)胞比例,研究趨化因子在腫瘤免疫中起到的全身效應(yīng)，通過(guò)腫瘤生長(zhǎng)比較，研究趨化因子SLC的局部效應(yīng)。 結(jié)果：將構(gòu)建好的pcDNA3.1(-)-SLC 用EcoRI,BamHI 雙酶切后電泳，可觀察到約400bp 及5300bp 兩條帶，其中約400bp 為SLC 基因片段，

3、約5300bp 為pcDNA3.1(-)空載體。表明pcDNA3.1(-)-SLC 真核表達(dá)載體構(gòu)建成功。經(jīng)電穿孔轉(zhuǎn)染表達(dá)后，westernblot 可見特異性結(jié)合條帶，與理論預(yù)期值相符，證明其可以在體外表達(dá)；將質(zhì)粒注入腫瘤瘤體，可觀察到以下現(xiàn)象：與生理鹽水對(duì)照組相比，小鼠血液與脾臟淋巴細(xì)胞比例明顯降低，小鼠腫瘤生長(zhǎng)明顯受抑，而且注射SLC 的量越大，抑瘤效果越明顯。 結(jié)論：成功構(gòu)建了SLC 真核表達(dá)載體，在宮頸癌細(xì)胞Hela