次級(jí)淋巴趨化因子基因與腫瘤抗原修飾樹(shù)突狀細(xì)胞抗小鼠前列腺癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的: 從小鼠骨髓分離DC前體細(xì)胞，體外培養(yǎng)、擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)所需的功能性DC。將RM-1前列腺癌細(xì)胞的裂解產(chǎn)物和SLC基因共轉(zhuǎn)染DC,構(gòu)建前列腺癌DC瘤苗。研究該DC瘤苗的免疫生物學(xué)特性;觀察SLC＋Lysate-DC瘤苗對(duì)RM-1荷瘤小鼠的抗腫瘤免疫治療作用;探討SLC＋Lysate-DC瘤苗的抗腫瘤作用機(jī)制。 方法: 從小鼠骨髓分離前體細(xì)胞,在細(xì)胞因子GM-CSF和IL-4聯(lián)合作用下,經(jīng)過(guò)手法篩選,大量制備骨髓DC。通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)

2、染法將SLC基因轉(zhuǎn)染DC,同時(shí)將RM-1前列腺癌細(xì)胞的裂解產(chǎn)物負(fù)載DC,制備SLC+Lysate-DC前列腺癌瘤苗;RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染SLC的表達(dá)。建立小鼠前列腺癌模型, 將DC瘤苗瘤內(nèi)注射至小鼠前列腺癌內(nèi)，進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，觀察其對(duì)荷瘤小鼠的免疫治療作用。免疫組化熒光染色檢測(cè)該DC瘤苗對(duì)CD4＋、CD8＋T細(xì)胞及CD11＋DC的趨化作用。 結(jié)果：在細(xì)胞因子GM-CSF和IL-4聯(lián)合作用下, 經(jīng)過(guò)7天的培養(yǎng)擴(kuò)增,每只小鼠可得到約

3、5～10×106的DC。將SLC質(zhì)粒通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染培養(yǎng)4天的DC,同時(shí)將RM-1前列腺癌細(xì)胞的裂解產(chǎn)物負(fù)載DC,構(gòu)建SLC+Lysate-DC瘤苗,經(jīng)RT-PCR檢測(cè)證實(shí)轉(zhuǎn)染DC的SLCmRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示SLC＋Lysate-DC組能顯著抑制腫瘤的生長(zhǎng),能明顯延長(zhǎng)荷瘤小鼠的存活時(shí)間,瘤體內(nèi)有明顯的CD4＋、CD8＋T細(xì)胞和CD11＋DC浸潤(rùn)。 結(jié)論: 小鼠骨髓前體細(xì)胞在細(xì)胞因子GM-CSF和IL-4聯(lián)合作