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文檔簡介
1、鴨疫里默氏桿菌(Riemerella anatipestifer,RA)引起的鴨傳染性漿膜是家鴨、火雞和多種其它鳥類的一種接觸傳染性疾病。該病呈世界范圍分布,幾乎己在所有的集約化養(yǎng)鴨生產(chǎn)的國家發(fā)現(xiàn)。該病的發(fā)病率和死亡率較高,己成為目前危害世界各國養(yǎng)鴨業(yè)最為嚴重的傳染病之一,給養(yǎng)鴨業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。本實驗室在前期對我國鴨傳染性漿膜炎的病原流行病學(xué)進行了研究,分離、鑒定、保存有500余株鴨疫里默氏桿菌。本文在此基礎(chǔ)上篩選出2株低致病力
2、的鴨疫里默氏桿菌,通過16SrDNA核苷酸序列測定及對雛鴨的半數(shù)致死量與毒力穩(wěn)定性測定,確證為鴨疫里默氏桿菌自然弱毒株,并對其侵襲性、培養(yǎng)濾液的細胞毒性、免疫原性、培養(yǎng)及生化特性等進行研究,可為進一步研究鴨疫里默氏桿菌毒力因子和弱毒菌苗等提供材料。本研究的主要結(jié)果如下: 1.以擴增細菌16SrDNA的通用引物(16S-8F/20)和(16S-1512R/21)為引物,以基因組DNA為模板進行PCR擴增,測序顯示DY株和517株的
3、擴增部分片段大小分別為1436bp和1440bp,BLAST軟件分析發(fā)現(xiàn)二者的核苷酸序列與已報道鴨疫里氏桿菌的同源性均達到99%以上,且相互之間的同源性為99%以上。 2.鴨疫里默氏桿菌自然弱毒517株和DY株對14日齡非免健康四川麻鴨的半數(shù)致死量分別為1.18×1010CFU和2.3x1010CFU:二者在lO-14日齡叵免健康鴨體內(nèi)連傳10代后的半數(shù)致死量分別為1.02x1010和2.2×1010CFU。 3.鴨疫里
4、默氏桿菌自然弱毒517株和DY株利用LB培養(yǎng),去細胞培養(yǎng)物經(jīng)超濾濃縮、硫酸銨沉淀、透析除鹽及微孔濾膜過濾除菌制備的培養(yǎng)濾液與鴨成纖維細胞共培養(yǎng),在4小時內(nèi)成纖維細胞形態(tài)與空自對照間差異不明顯,而陽性對照AF株則呈現(xiàn)細胞膜消失、胞質(zhì)流失與核濃縮等;517株和DY株與鴨胚成纖維細胞共作用5h測得侵襲力分別為1320(CFU/ml)和1262(CFU/ml),與強毒AF株1510(CFU/ml)間差異顯著(0.10
5、4.鴨疫里默氏桿菌自然弱毒517株和DY株滅活菌液與礦物油佐劑乳化制成滅活菌苗(5.5×109CFU/ml)免疫5日齡四川麻鴨,O.5ml/只,免疫后21天的血清抗體水平(ELISA)分別為1.618和1.884(A值)、同血清型強毒菌株攻毒保護率均為100%,28天的血清抗體水平分別為1.549和1.724、攻毒保護率均為100%;1.1×107CFU活菌接種后,試驗鴨無明顯的臨床表現(xiàn),21天的血清抗體水平分別為1.417和1.379
6、、攻毒保護率均為80%,28天的血清抗體水平分別為1.289和1.491、攻毒保護率分別為75%和100%。 5.鴨疫里默氏桿菌自然弱毒517株和DY株為具有莢膜的革蘭氏陰性小桿菌,在巧克力營養(yǎng)平板上生長旺盛,菌落為奶油狀,能在LB營養(yǎng)瓊脂平板上生長;除517株發(fā)酵血清菊糖、阿拉伯糖和DY株發(fā)酵血清菊糖、阿拉伯糖、糊精外,不利用葡萄糖等其它碳水化合物;過氧化氫酶均呈陽性;明膠液化試驗均呈陰性;對青霉素、氨芐青霉素、阿莫西林、痢特
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