虎紋捕鳥蛛毒素-XV的分離純化和部分性質(zhì)研究及ZIC肽的二硫鍵定位.pdf

1、虎紋捕鳥蛛毒素-ⅩⅤ(HWTX-ⅩⅤ)是從虎紋捕鳥蛛初毒中分離純化出來(lái)的一種含量很少的毒素,MALDI-TOF質(zhì)譜鑒定和Edman降解測(cè)序結(jié)果表明:HWTX—ⅩⅤ的分子量為3508.5 Da,含有31個(gè)氨基酸殘基,其中6個(gè)半胱氨酸殘基形成了三對(duì)二硫鍵(Ⅰ-Ⅳ,Ⅱ—Ⅴ和Ⅲ-Ⅵ)。雖然通過上網(wǎng)搜尋發(fā)現(xiàn)虎紋捕鳥蛛毒素-ⅩⅤ與我們實(shí)驗(yàn)室以前研究過的虎紋捕鳥蛛凝集素-Ⅰ(SHL-Ⅰ)有很高的序列同源性(74％),但與虎紋捕鳥蛛凝集素-Ⅰ不同的是虎

2、紋捕鳥蛛毒素-ⅩⅤ沒有細(xì)胞凝集活性,而毒性試驗(yàn)卻表明虎紋捕鳥蛛毒素-ⅩⅤ具有虎紋捕鳥蛛凝集素-Ⅰ所沒有的神經(jīng)毒性。本文通過比較兩者的空間結(jié)構(gòu),表明兩個(gè)多肽的結(jié)構(gòu)差異是導(dǎo)致上述不同的生物學(xué)活性的重要因素。
　　 ZIC肽是深圳翰宇公司合成的一種芋螺毒素,ZIC肽分子量為2639.6 Da,含有25個(gè)氨基酸殘基,含6個(gè)半胱氨酸殘基,其位置在第1,8,15,16,20和25位,其N端和C端都是半胱氨酸。本文采用TCEP部分還原結(jié)合Ed

3、man降解測(cè)序測(cè)定了ZIC肽的二硫鍵連接方式。通過對(duì)比實(shí)測(cè)分子量和理論計(jì)算分子量,可確定該多肽6個(gè)半胱氨酸殘基形成了3對(duì)二硫鍵；ZIC肽在酸性條件下與TCEP反應(yīng)分別形成1、2和3對(duì)二硫鍵被還原的多肽；將部分還原的多肽(1和2對(duì)二硫鍵被還原)與碘乙酰胺(IAA)反應(yīng),使還原的游離巰基烷基化:烷基化的半胱氨酸殘基位置通過Edman降解測(cè)序予以分析。最終確定ZIC肽的二硫鍵連接方式為Cys1-Cys16、Cys8-Cys20和Cys15-C