布美他尼對缺氧致癇幼鼠神經(jīng)保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的:
　　新生兒期是癇性發(fā)作的高峰期，主要病因包括缺血缺氧性腦病、神經(jīng)系統(tǒng)感染、先天性發(fā)育異常等。新生兒癇性發(fā)作會引起癲癇易感性增加、行為異常、精神障礙、學(xué)習(xí)能力減退等長期不良影響。新生兒癲癇的臨床處理頗為棘手，目前苯巴比妥和苯二氮卓類藥物是最常用的一線治療藥物，但療效欠佳，因此探索新的癲癇后神經(jīng)元保護(hù)方法有著重要臨床意義。布美他尼(bumetanide)是Na+-K+-2Cl-同向轉(zhuǎn)運(yùn)體（Na+-K+-2Cl- cotrans

2、porters，NKCCs）的特異性拮抗劑，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要拮抗細(xì)胞膜上的NKCC1，減少氯離子內(nèi)流入細(xì)胞。臨床研究發(fā)現(xiàn)，小劑量的布美他尼可以減輕新生兒強(qiáng)直陣攣發(fā)作程度，具有一定的抗驚厥作用。有實(shí)驗(yàn)研究顯示，新生期大鼠預(yù)先給予布美他尼治療再誘導(dǎo)癇性發(fā)作，皮層及海馬區(qū)神經(jīng)元的突觸興奮性明顯減弱，大鼠發(fā)作程度也明顯減輕。在幼鼠缺氧致癇模型中也證實(shí)布美他尼可以增強(qiáng)苯巴比妥的抗癲癇作用。目前關(guān)于布美他尼的實(shí)驗(yàn)研究多局限于行為學(xué)觀察及電生理方面

3、，對于該藥物是否影響癲癇后幼年大鼠的神經(jīng)發(fā)生及學(xué)習(xí)記憶功能了解甚少。因此本研究運(yùn)用全面缺氧誘導(dǎo)幼鼠癇性發(fā)作，探討缺氧致癇對幼鼠海馬齒狀回神經(jīng)發(fā)生和中間神經(jīng)元數(shù)量的影響，并探討NKCC1抑制劑布美他尼對缺氧致癇幼鼠海馬神經(jīng)發(fā)生、腦電活動及學(xué)習(xí)記憶功能的影響。
　　方法:
　　1、應(yīng)用全面缺氧誘導(dǎo)出生后10天（postnatal，P）大鼠癇性發(fā)作，通過免疫熒光染色的方法觀察缺氧致癇后海馬齒狀回新生細(xì)胞增殖、樹突形態(tài)及表達(dá)微清蛋白

4、（parvalbumin，PV）、鈣視網(wǎng)膜蛋白(calretinin，CR)、神經(jīng)肽Y(neuropeptideY，NPY)的γ-氨基丁酸（gamma-aminobutyric acid，GABA）能中間神經(jīng)元數(shù)量的變化。
　　2、幼鼠缺氧致癇后連續(xù)3周腹腔注射布美他尼，采用免疫熒光染色的方法檢測藥物對海馬齒狀回新生細(xì)胞增殖、分化和樹突形態(tài)的影響，用腦電圖儀記錄致癇1月后大鼠的腦電活動并應(yīng)用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)評價(jià)大鼠學(xué)習(xí)記憶能

5、力。
　　結(jié)果:
　　1、在致癇后1周和1月，缺氧組大鼠海馬齒狀回溴脫氧尿苷(bromodeoxyuridine，BrdU)陽性細(xì)胞數(shù)量較對照組明顯增加(P＜0.01)，在致癇后2月，缺氧組和對照組BrdU陽性細(xì)胞數(shù)量無明顯差異(P＞0.05)。
　　2、在致癇后1周，缺氧組大鼠海馬齒狀回雙皮質(zhì)素(doublecortin，DCX)陽性細(xì)胞頂樹突長度較對照組明顯延長(P＜0.01)，在致癇后1月和2月，頂樹突長度較對照

6、組明顯縮短(P＜0.01);在致癇后1周、1月和2月，基底樹突長度均較對照組明顯延長(P＜0.01)。
　　3、大鼠缺氧致癇后，海馬齒狀回PV、NPY、CR中間神經(jīng)元數(shù)量明顯減少(P＜0.01)，致癇1月時(shí)減少最明顯，在致癇后2月，NPY、CR中間神經(jīng)元數(shù)量較致癇1月時(shí)有所增加。
　　4、布美他尼促進(jìn)了缺氧致癇1月后海馬齒狀回新生細(xì)胞的增殖和頂樹突長度的增加，而對缺氧致癇后新生細(xì)胞的分化無明顯影響。
　　5、布美他尼改