MiR210和Stat3在全腦缺血大鼠腦組織的表達(dá)通過HIF-1α通路對(duì)神經(jīng)元凋亡的影響.pdf

1、目的：臨床上，心臟驟停、嚴(yán)重感染、中毒、休克、麻醉、外科手術(shù)中的低血壓狀況、全面性癲癇發(fā)作等多種危急癥均可造成的急性腦組織血流中斷或低灌流狀態(tài)，引起全腦能量及氧流量供應(yīng)不足。腦組織代謝旺盛，能量供應(yīng)主要來源于糖的有氧代謝，因此腦組織對(duì)缺血缺氧非常敏感。腦組織血流供應(yīng)中斷超過5分鐘，神經(jīng)細(xì)胞即可出現(xiàn)不可逆性損傷。腦缺血發(fā)生后腦組織氧供應(yīng)不足及能量供給缺乏引起大量的信號(hào)通路被激活，參與調(diào)控神經(jīng)細(xì)胞的損傷。本實(shí)驗(yàn)旨在研究全腦缺血再灌注損傷大鼠

2、海馬信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3(Stat3)及大腦皮層MicroRNA210(MiR210)的表達(dá)變化，探討MicroRNA210(MiR210)及Stat3對(duì)全腦缺血大鼠腦組織神經(jīng)元凋亡的影響與缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)之間的相關(guān)性及調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　方法：采用改良的Pulsinelli四血管阻斷法制備大鼠全腦缺血再灌注模型，共用SD大鼠90只，其中66只建模成功（建模成功率約73％）。90只250～280g健康成年雄性SD大鼠隨

3、機(jī)分為假手術(shù)組（Sham組，n=6）、全腦缺血組(GI組，n=30)、Stattic+全腦缺血組(Stattic+GI組，n=30)，根據(jù)再灌注時(shí)間的不同將GI組和Static+ GI組均隨機(jī)分為6h組、12h組、24h組、72h組、120h組5個(gè)亞組，每組6只大鼠，分別于再灌注后6h、12h、24h、72h、120h斷頭取腦。假手術(shù)組大鼠電凝雙側(cè)椎動(dòng)脈，分離但不結(jié)扎頸動(dòng)脈，并于術(shù)后立即斷頭取腦。Stattic+GI組大鼠術(shù)后立即給予S

4、tattic溶劑（溶入0.2％ DMSO中）腹腔注射(10mL/kg)，以后每隔24h在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)給藥。假手術(shù)組及GI組給予相同體積的0.2％ DMSO腹腔注射。使用免疫印跡法檢測大鼠海馬Stat3、p-Stat3及HIF-1α蛋白的表達(dá)，實(shí)時(shí)定量PCR法檢測大鼠大腦皮層MiR210、Stat3mRNA、VEGF mRNA、Caspase3mRNA及HIF-1αmRNA的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：1.免疫印跡檢測結(jié)果①與假手術(shù)組(Sh

5、am組)相比，GI組大鼠海馬Stat3蛋白于缺血再灌注后6h表達(dá)開始增加(P＜0.05），并于術(shù)后24h表達(dá)達(dá)到峰值(p＜0.01); p-Stat3蛋白水平顯著增加(P＜0.05），于缺血再灌注術(shù)后6h即達(dá)到表達(dá)高峰(P＜0.01)。②與GI組相比，Stattic+ GI組大鼠海馬Stat3蛋白表達(dá)水平變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05); P-Stat3蛋白表達(dá)水平明顯下降(P＜0.05)。③與假手術(shù)組(Sham組)相比，GI組大鼠海馬

6、HIF-1α蛋白于缺血再灌注后6h表達(dá)開始增加（P＜0.05），并于術(shù)后24h表達(dá)達(dá)到峰值(P＜0.01)。④與GI組相比，Stattic+全腦缺血組大鼠海馬HIF-1α蛋白表達(dá)水平明顯下降（P＜0.05），在24h時(shí)表達(dá)水平顯著下降(P＜0.01)。2.實(shí)時(shí)定量PCR檢測結(jié)果①與假手術(shù)組(Sham組)相比，GI組大鼠大腦皮層MiR210及Stat3mRNA表達(dá)水平明顯增加（P＜0.05），并于術(shù)后24h表達(dá)達(dá)到峰值(P＜0.01)。②

7、與假手術(shù)組(Sham組)相比，GI組大鼠大腦皮層HIF-1αmRNA、VEGF mRNA及Capase3 mRNA表達(dá)水平明顯增加(P＜0.05)。③與GI組相比，Stattic+ GI組大鼠大腦皮層HIF-1αmRNA表達(dá)水平從術(shù)后12h開始明顯下降（P＜0.05），在12h、24h及72h時(shí)表達(dá)水平顯著下降(P＜0.01);VEGFmRNA在12h、24h、72h及120h時(shí)表達(dá)水平明顯下降(P＜0.05); Capase3 mRN