寧夏回漢族人群動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)基因甲基化譜差異分析.pdf

1、目的：
　　揭示DNA甲基化，在寧夏回漢族人群中動(dòng)脈粥樣硬化(AS)發(fā)生發(fā)展過(guò)程中出現(xiàn)的異常改變，建立回漢族兩民族之間，AS的特異性DNA甲基化譜，探索特異性DNA甲基化譜，在回漢人群中，對(duì)AS的早期風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及預(yù)測(cè)作用，為早期預(yù)防、診斷及治療AS提供新思路及線索。
　　方法：
　　研究對(duì)象：寧夏回漢AS和正常健康人群，年齡30-65歲；收集標(biāo)本時(shí)間：2013年1月至2014年2月；收集標(biāo)本地點(diǎn)：寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院心內(nèi)科

2、和體檢部。標(biāo)本采集及檢測(cè)：空腹采集足夠的靜脈血液，分離血漿和血細(xì)胞，生化分析儀檢測(cè)血漿中的TG、TC、HDL和LDL，血細(xì)胞用于提取DNA和RNA，檢測(cè)外周血細(xì)胞DNA甲基化及其mRNA表達(dá)；研究對(duì)象分組標(biāo)準(zhǔn)：臨床指征和血脂水平作為輔助診斷，頸動(dòng)脈多普勒超聲確診AS斑塊存在的人群，分為AS組，跟據(jù)民族，分為回族AS組和漢族AS組；頸動(dòng)脈多普勒超聲確診無(wú)內(nèi)膜增厚和斑塊形成的人群，作為正對(duì)常對(duì)照組，根據(jù)民族，分為回族正常對(duì)照組和漢族正常對(duì)照

3、組；總共四組，每組的樣本各50例，提取每組外周血樣本的DNA和RNA進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)，將從樣本中提取的DNA進(jìn)行重亞硫酸鹽修飾，用ntMS-PCR檢測(cè)篩選的11個(gè)基因的啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)建譜基因的mRNA相對(duì)表達(dá)水平，探討這兩民族AS的DNA甲基化是否存在差異以及和基因表達(dá)的關(guān)系，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)分析，篩選出特異性和敏感性較高的基因，作為研究目標(biāo)，建立回漢族AS特異性DNA甲基化譜，評(píng)價(jià)DNA甲基化譜，在回漢族AS疾病，

4、早期分子生物學(xué)標(biāo)志物預(yù)測(cè)及診斷價(jià)值。
　　結(jié)果：
　　結(jié)果顯示，LCAT、PPARα、TIMP-1、ICAM1和ABCA1這五個(gè)基因的甲基化程度，在回族AS組和回族對(duì)照組間，有著明顯差異（P<0.05）；PPARα、TIMP-1和ABCA1三個(gè)基因甲基化程度，在漢族AS組和漢族AS組對(duì)照組間，有差異（P<0.05）；結(jié)果還顯示，LCAT、PPARα、TIMP-1和ABCA1，在回族AS人群中，具有較好的診斷價(jià)值（P<0.05

5、）；在漢族AS人群中，只有TIMP-1具有診斷價(jià)值，如果將LCAT、PPARα、TIMP-1和ABCA1這四個(gè)基因聯(lián)合檢測(cè)AS，則預(yù)測(cè)回族AS的靈敏度和特異度達(dá)到86.1%和88.1%，聯(lián)合診斷價(jià)值達(dá)到0.923，這一結(jié)果說(shuō)明建立及應(yīng)用DNA甲基化譜在預(yù)測(cè)早期回族AS的發(fā)生及發(fā)展有意義。
　　結(jié)論：
　　1.回族AS組和回族對(duì)照組相比較，LCAT、PPARα、TIMP-1、ICAM1和ABCA1五個(gè)基因甲基化改變有顯著差異。