女性非小細(xì)胞肺癌CD44、CD82表達(dá)、DNA含量和凋亡率的相關(guān)性研究.pdf

1、肺癌是全球發(fā)病率最高、對(duì)人類健康與生命危害最大的惡性腫瘤之一。近三十年來，肺癌發(fā)病率不斷上升，女性尤為突出。在我國，肺癌的發(fā)病率和死亡率居男性惡性腫瘤的首位，女性發(fā)病率的第二位，死亡率的第一位。惡性腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移是受多種因素調(diào)控的復(fù)雜過程，既有腫瘤轉(zhuǎn)移基因的參與，又有轉(zhuǎn)移抑制基因的調(diào)控，并涉及到腫瘤細(xì)胞惡性增殖、腫瘤組織新生血管形成、腫瘤細(xì)胞粘附分泌蛋白降解基質(zhì)及腫瘤細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)、逃避免疫監(jiān)視等一系列過程，腫瘤的惡性程度取決于其本身的

2、DNA含量、倍體構(gòu)成及染色體畸變等各個(gè)方面。近年來發(fā)現(xiàn)粘附分子CD44．和CD82及其變異體在腫瘤的預(yù)測(cè)、早期診斷、病情進(jìn)展、轉(zhuǎn)移潛能及預(yù)后的估計(jì)等方面具有很大的潛在價(jià)值。 CD44基因蛋白(Cluster of Differentiation 44)是一種分布極為廣泛的細(xì)胞表面跨膜糖蛋白，在淋巴細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞表面均有表達(dá)，屬于未分類的粘附分子。其正常功能是作為受體識(shí)別透明質(zhì)酸(HA)和膠原蛋白I、Ⅱ等，主要參與淋巴

3、細(xì)胞的激活以及細(xì)胞之間、細(xì)胞與介質(zhì)間的特異性粘附過程，CD44基因的變異多樣性表達(dá)與腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。CD82基因蛋白(Cluster ofDifferentiation 82)為轉(zhuǎn)膜4超家族的成員，在結(jié)構(gòu)上屬于細(xì)胞膜糖蛋白，其作用是促使細(xì)胞膜表面的蛋白定位，在信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞粘附及決定細(xì)胞運(yùn)動(dòng)方式上起重要作用，最近研究表明CD82對(duì)多種腫瘤的轉(zhuǎn)移具有抑制作用。DNA含量測(cè)定是通過反映腫瘤細(xì)胞核酸代謝狀況了解其生長增殖活動(dòng)的一項(xiàng)新

4、方法，為臨床判斷腫瘤的演進(jìn)狀態(tài)和惡性程度提供了客觀的依據(jù)。本研究應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了女性非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織中CD44和CD82的表達(dá)、DNA含量和凋亡率，同時(shí)檢測(cè)了女性NSCLC患者外周血淋巴細(xì)胞中CD44的表達(dá)，并分析了不同病理特征與它們之間的關(guān)系，確定它們?cè)谂袛嗄[瘤的轉(zhuǎn)移潛能和預(yù)后中的意義，為分析女性NSCLC的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及診斷提供依據(jù)。 材料與方法: 女性NSCLC患者組織61例，來源于遼寧省腫瘤

5、醫(yī)院2002～2005年手術(shù)切除標(biāo)本，所有患者均經(jīng)組織病理學(xué)確診?；颊邽榉俏鼰熍?，年齡33～71歲。其中鱗癌18例，腺癌43例，按UICC(1997)分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行TNM分期，I期14例，Ⅱ期21例，Ⅲ期20例，Ⅳ期6例；低分化27例，高、中分化34例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者42例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者19例。同時(shí)取距腫塊5cm以上的肺組織作為癌旁對(duì)照組；取45例同期手術(shù)的肺部良性病變(如肺結(jié)核)組織作為良性對(duì)照組。在61例肺癌患者中抽取32例患者的

6、外周血2ml進(jìn)行CD44的檢測(cè)，32例患者中鱗癌8例，腺癌24例，按UICC(1997)分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行TNM分期，I期10例，Ⅱ期11例，Ⅲ期6例，Ⅳ期5例；低分化14例，高、中分化18例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者22例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者10例，正常對(duì)照組為健康獻(xiàn)血者32人，均為女性。 肺組織采用人工機(jī)械破碎法制成組織單細(xì)胞懸液，過300目尼龍網(wǎng)，經(jīng)ficoll-hypaque密度梯度離心獲取細(xì)胞懸液，外周血采用常規(guī)分離淋巴細(xì)胞的方法獲取淋巴

7、細(xì)胞懸液，并對(duì)上述兩種細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)然后進(jìn)行熒光染色，加入鼠抗人單克隆抗體CD44-FITC、鼠抗人單克隆抗體CD82-PE及陰性對(duì)照羊抗鼠IgG-FIFC，DNA染液等。用．FACSsort型流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，進(jìn)行t檢驗(yàn)，直線相關(guān)分析。 結(jié)果: 61例女性NSCLC患者中異倍體腫瘤占75.41％(46/61)，二倍體腫瘤占24.59％(15/61)，肺癌組CD44表達(dá)和DI(

8、DNA index)值顯著高于癌旁對(duì)照組和良性對(duì)照組(P<0.01)，而CD82的表達(dá)和凋亡率顯著低于癌旁對(duì)照組和良性對(duì)照組(P<0.01)，癌旁對(duì)照組中CD44、CD82的表達(dá)、DI值和凋亡率與良性對(duì)照組相比差異無顯著性(P>0.05)；32例女性NSCLC患者外周血淋巴細(xì)胞中CD44的表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組。研究發(fā)現(xiàn)I+Ⅱ期肺癌組織中CD44的表達(dá)和DI值低于Ⅲ+Ⅳ期(P<0．01)，而CD82表達(dá)和細(xì)胞凋亡率則是I+Ⅱ期高于Ⅲ+Ⅳ

9、期(P<0.05)：中高分化與低分化之間CD44、CD82的表達(dá)和DI值差異有顯著性(P<0.01)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者其CD44表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<00.5)，而CD82的表達(dá)則是有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。在I+Ⅱ期肺癌外周血淋巴細(xì)胞中CD44的表達(dá)低于Ⅲ+Ⅳ期(P<0.05)，中高分化與低分化之間外周血淋巴細(xì)胞中CD44的表達(dá)差異有顯著性(P<0.01)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者其CD44表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P

10、<0.05)。DI值和凋亡率與肺癌患者的年齡、病理組織類型、原發(fā)腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移未見相關(guān)性(P>0.05)，CD44和CD82的表達(dá)與女性肺癌患者的年齡、原發(fā)腫瘤大小、病理組織類型等病理指標(biāo)之間未見相關(guān)性(P>0.05)。CD44在肺癌患者組織和外周血淋巴細(xì)胞中的表達(dá)有相關(guān)性(r=0.837，p<0.01)。隨著DI值不斷升高，CD44的表達(dá)也逐漸升高，與DI值呈正相關(guān)(r=0.782，P<0.01)；CD82的表達(dá)與DI值呈負(fù)相關(guān)

11、(r=-0.652，P<0.01)，凋亡率也與DI值呈負(fù)相關(guān)(r=-0.460，P<0.01)：CD44的表達(dá)與CD82的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.804，P<0.01)。討論肺癌是發(fā)病率和死亡率增長最快、對(duì)人類健康與生命危害最大的惡性腫瘤之一。自19世紀(jì)中葉Laennec首次報(bào)告以來，其發(fā)病率不斷上升，女性尤為突出。近年來，國內(nèi)外學(xué)者針對(duì)肺癌進(jìn)行了大量、廣泛、深入且有價(jià)值的研究，使我們認(rèn)識(shí)到肺癌的發(fā)生、發(fā)展是多因素共同作用的結(jié)果，轉(zhuǎn)

12、移是影響癌癥患者預(yù)后的關(guān)鍵因素之一，是肺癌死亡的重要原因。 在以往的研究中，大多采用免疫組化方法定性檢測(cè)肺癌組織中的CD44和CD82的表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移和預(yù)后的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)采用流式細(xì)胞儀(flow cytometry，F(xiàn)CM)對(duì)61例女性NSCLC患者癌組織和距癌旁5cm以上組織及45例肺部良性病變組織中CD44、CD82的表達(dá)、．DNA含量和凋亡率進(jìn)行了定量檢測(cè)，并聯(lián)合檢測(cè)了32例女性NSCLC患者外周血淋巴細(xì)胞中CD44的表達(dá)

13、。研究結(jié)果提示CD44的表達(dá)異常可能與肺癌的發(fā)生有關(guān)，說明CD44．與肺癌病情的進(jìn)展密切相關(guān)，在中、晚期肺癌中高表達(dá)，CD44高表達(dá)對(duì)肺癌細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移起重要作用，可作為判斷肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的一項(xiàng)新指標(biāo)，提示CD44在抑制T細(xì)胞凋亡的免疫調(diào)節(jié)功能，使癌細(xì)胞逃避機(jī)體免疫機(jī)制，在促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移中起重要作用。結(jié)合CD44在肺癌患者組織和外周血淋巴細(xì)胞中表達(dá)的相關(guān)性，提示外周血中CD44的含量與肺癌細(xì)胞中CD44的表達(dá)量有關(guān)。在CD82與

14、NSCLC發(fā)生及轉(zhuǎn)移的研究中，我們的研究結(jié)果表明CD82的表達(dá)下調(diào)可能與肺癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，CD82表達(dá)水平的降低可提高肺癌的轉(zhuǎn)移潛能，它對(duì)于增加癌細(xì)胞的惡性度及促進(jìn)癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移等可能有著重要作用。在細(xì)胞癌變過程中，腫瘤細(xì)胞的生長調(diào)控發(fā)生差錯(cuò)，染色體畸變，使細(xì)胞DNA含量也隨之改變，因此通過DNA含量的檢測(cè)有助于對(duì)惡性病變的定性診斷。本研究結(jié)果提示DNA含量增加與細(xì)胞增殖活性增強(qiáng)在女性NSCLC中是頻繁發(fā)生的。凋亡率是FCM反映細(xì)胞凋

15、亡數(shù)量的客觀指標(biāo)，本研究提示肺癌的發(fā)生、發(fā)展與細(xì)胞增殖和凋亡之間平衡失調(diào)有關(guān)。在女性NSCLC中CD44、CD82、DI值和凋亡率的相關(guān)性研究中，結(jié)果說明在女性NSCLC的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中，不僅存在細(xì)胞分裂增加，增殖旺盛，而且存在凋亡細(xì)胞數(shù)目顯著減少，另一方面CD44高表達(dá)與CD82低表達(dá)使腫瘤細(xì)胞間的粘附作用降低，與細(xì)胞外基質(zhì)問的粘附作用增強(qiáng)，從而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲能力，促進(jìn)轉(zhuǎn)移。 結(jié)論: 1．肺癌患者組織細(xì)胞中C