熱休克蛋白70碳末端反應(yīng)蛋白(CHIP)參與高糖誘導(dǎo)的心肌損傷.pdf

1、目的：
　　大量研究表明熱休克蛋白70碳末端反應(yīng)蛋白(CHIP)在細(xì)胞損傷、凋亡、熱應(yīng)激等方面起非常重要的作用。本次研究探討CHIP在高糖誘導(dǎo)的心肌損傷中的作用，假設(shè)通過敲減CHIP在心肌細(xì)胞的表達(dá)可加重高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷。
　　方法：
　　1、提取原代心肌細(xì)胞后分為6個實驗組：低糖（LG）組，高糖（HG）組，低糖+病毒（CHIP+LG）組，高糖+病毒（CHIP+HG）組，低糖+空病毒（LV-NC+LG）組，高糖+

2、空病毒（LV-NC+HG）組；應(yīng)用LV-CHIP-RNAi和LV-NC慢病毒轉(zhuǎn)染原代心肌細(xì)胞；高糖培養(yǎng)應(yīng)用25.5mmol/L葡萄糖濃度培養(yǎng)24h，低糖培養(yǎng)應(yīng)用5.5mmol/L葡萄糖濃度培養(yǎng)24h。
　　2、檢測各組上清液中LDH的活性；ELISA試劑盒檢測IL-1β、IL-6的表達(dá)；Annexin V-PE/7-AAD試劑盒檢測細(xì)胞凋亡；qRT-PCR法檢測CHIP、Bcl-2、Bax、Caspase3 mRNA水平。

3、　　結(jié)果：
　　1、在顯微鏡下，體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞，形態(tài)呈現(xiàn)不規(guī)則多邊形，培養(yǎng)72小時后大部分細(xì)胞融合生長，全屏視野內(nèi)大部分細(xì)胞搏動，搏動頻率約為60次/分。通過熒光顯微鏡觀察，在轉(zhuǎn)染慢病毒72小時后，可見熒光表達(dá)最強，顯示60％以上的心肌細(xì)胞表達(dá)綠色免疫熒光。
　　2、各實驗結(jié)果：
　　1）HG組和LG組相比：LDH活性升高；炎癥因子IL-1β、IL-6含量升高；心肌凋亡率升高；CHIP mRNA、Bax mRNA、

4、Caspase3 mRNA水平上調(diào)，Bcl-2 mRNA水平下調(diào)。
　　2）LV-NC+LG組和LG組、LV-NC+HG組和HG組相比：LDH活性、IL-1β、IL-6含量、心肌凋亡率無明顯差別；Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、Caspase3 mRNA的水平無明顯改變。
　　3）CHIP+HG組和LV-NC+HG組相比：LDH活性明顯升高；IL-1β升高，IL-6明顯升高；心肌凋亡率顯著升高；Bax mRNA、Ca