卵泡液和胚胎培養(yǎng)液中MMP9的ELISA法測定及其應(yīng)用于評(píng)估胚胎質(zhì)量的初步探討.pdf

1、目的：在人類體外受精．胚胎移植(in-vitro fertilization-embryotransfer，IVF-ET)技術(shù)中，如何選擇高質(zhì)量的胚胎進(jìn)行移植，在降低多胎率的同時(shí)不影響妊娠率一直是輔助生育領(lǐng)域頗受關(guān)注的課題。目前較普遍采用的胚胎形態(tài)學(xué)篩選指標(biāo)還存在一定的局限性，因而有學(xué)者從多方面探索一些與胚胎發(fā)育和妊娠率相關(guān)的因素，如卵子形態(tài)、原核期評(píng)分等方面入手嘗試，都取得了一些成效。近年來，關(guān)于著床相關(guān)因子與胚胎質(zhì)量之間的關(guān)系引起了

2、輔助生育工作者的興趣，認(rèn)為是一個(gè)較好的反映胚胎質(zhì)量的預(yù)測指標(biāo)?；|(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)作為水解多種細(xì)胞外基質(zhì)成分的一組蛋白水解酶，廣泛參與胚泡的植入及胎盤形成過程。其中，明膠酶-B(MMP-9)特異表達(dá)于卵巢顆粒細(xì)胞和胚泡著床區(qū)的滋養(yǎng)層細(xì)胞以及子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞局部，主要參與調(diào)節(jié)著床過程中細(xì)胞外基質(zhì)的降解。因?yàn)镸MP-9是哺乳動(dòng)物生殖著床過程中水解細(xì)胞外基質(zhì)的最重要的蛋白水解酶，所以它

3、已經(jīng)成為國際上研究最熱的著床相關(guān)因子之一。本研究的目的就是分析卵泡液和胚胎培養(yǎng)液中MMP9的分泌與胚胎發(fā)育的關(guān)系及其對(duì)IVF-ET結(jié)局的影響。 方法：本文研究對(duì)象為2006年8月～2007年4月就診于大連婦產(chǎn)醫(yī)院生殖內(nèi)分泌科，僅因雙側(cè)輸卵管阻塞且排除其它不孕因素(男性因素、子宮內(nèi)膜異位癥、PCOS等)，應(yīng)用長方案促排卵行IVF-ET的女性患者74例。本研究以MMP-9單克隆抗體為工具，以26例患者的90個(gè)卵泡液和48例患者的74

4、個(gè)孕早期胚胎(2cell，4cell，6cell，8cell，融合)培養(yǎng)液為研究對(duì)象，通過ELISA定量檢測卵泡液和胚胎培養(yǎng)液中MMP-9的分泌水平，應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法t檢驗(yàn)(針對(duì)計(jì)量資料)或x<'2>檢驗(yàn)(針對(duì)計(jì)數(shù)資料)進(jìn)行分析，以觀察早期胚胎不同發(fā)育階段(2cell、4ceIl、6cell、8cell、融和胚胎)MMP-9分泌的差別。此外，選擇卵泡液和胚胎培養(yǎng)液對(duì)應(yīng)的8cell I級(jí)的胚胎進(jìn)行移植，依據(jù)妊娠患者對(duì)應(yīng)的卵泡液和胚胎培養(yǎng)液中

5、MMP9的95﹪的置信區(qū)間臨界值為界分為高分泌組和低分泌組，進(jìn)一步分析兩組的種植率和妊娠率，以進(jìn)一步分析MMP-9的分泌水平對(duì)IVF-ET結(jié)局的影響。結(jié)果：(1)不同發(fā)育階段胚胎對(duì)應(yīng)的卵泡液和胚胎培養(yǎng)液中MMP9的分泌濃度比較：融>8cell>6cell>4cell>2cell，且各組之間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；(2)形態(tài)學(xué)評(píng)估8cell I級(jí)的胚胎對(duì)應(yīng)的卵泡液和胚胎培養(yǎng)液中MMP9的分泌濃度是不同的，高分泌組的種植率和妊娠率