黑龍江省部分地區(qū)綿羊三種腸道原蟲(chóng)基因分型及人獸共患可能性評(píng)價(jià).pdf

1、由寄生蟲(chóng)引起的疾病是全球感染性疾病的一個(gè)重要組成部分。許多種腸道寄生性原蟲(chóng)能引起人和動(dòng)物的腹瀉，甚至引發(fā)更嚴(yán)重的疾病，尤其是在免疫功能缺陷的群體中。畢氏腸微孢子蟲(chóng)（Enterocytozoon bieneusi）、十二指腸賈第蟲(chóng)（Giardia duodenalis）和隱孢子蟲(chóng)（Cryptosporidium spp.）是能夠感染人和多種哺乳動(dòng)物的重要的人獸共患腸道原蟲(chóng)。它們的臨床顯著性主要體現(xiàn)在人和幼齡動(dòng)物，尤其會(huì)使兒童和老人等免疫力

2、低下群體產(chǎn)生生長(zhǎng)緩慢和營(yíng)養(yǎng)失調(diào)等慢性感染癥狀。如今，這三種腸道原蟲(chóng)在人和動(dòng)物之間的傳播特點(diǎn)也成為了研究的熱點(diǎn)。目前，有關(guān)這三種腸道原蟲(chóng)在綿羊中的流行情況、傳播特點(diǎn)、基因型分布及宿主特異性等方面的研究較少。本研究對(duì)黑龍江部分地區(qū)綿羊中攜帶的三種腸道原蟲(chóng)進(jìn)行了基因型和亞型分型的研究，并評(píng)估其人獸共患可能性及重要性。
　　本試驗(yàn)針對(duì)畢氏腸微孢子蟲(chóng)核糖體內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)進(jìn)行PCR擴(kuò)增和測(cè)序分析，在489份綿羊糞便樣本中共鑒定出68

3、個(gè)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為13.9％。基于ITS位點(diǎn)序列多態(tài)性分析鑒定出5個(gè)已知基因型BEB6、CM7、CS-4、EbpC、OEB1和6個(gè)新基因型NESH1-NESH6。這些基因型在系統(tǒng)進(jìn)化分析中形成兩個(gè)遺傳組，其中基因型CS-4、EbpC和NESH1-NESH3分布在人獸共患遺傳組1中，而基因型BEB6、CM7、OEB1和NESH4-NESH6則分布在具有宿主特異性的遺傳組2中。大約70％的綿羊畢氏腸微孢子蟲(chóng)病例是由對(duì)人有致病力的基因型BEB6

4、、CS-4和EbpC所致。其中基因型CS-4和EbpC在中國(guó)東北地區(qū)的兒童和反芻動(dòng)物中同時(shí)被檢出，同樣在中國(guó)中部地區(qū)的人和水源中同時(shí)發(fā)現(xiàn)了基因型BEB6和EbpC，表明這些基因型具有人獸共患潛力。該研究還總結(jié)了反芻動(dòng)物畢氏腸微孢子蟲(chóng)在世界范圍內(nèi)的基因型分布、宿主范圍和遺傳進(jìn)化關(guān)系。數(shù)據(jù)分析表明分布于遺傳組2中的一些曾被認(rèn)為是具有反芻動(dòng)物特異性的基因型（如BEB4、BEB6、I和J）出現(xiàn)了明顯的宿主范圍擴(kuò)增現(xiàn)象。因此，應(yīng)當(dāng)重視遺傳組2中具

5、有低宿主特異性的基因型和其可能導(dǎo)致的人獸共患微孢子蟲(chóng)(microsporidiosis)病。
　　本研究應(yīng)用Feng等建立完善的多位點(diǎn)序列分型(MLST)方法對(duì)哈爾濱、大慶和齊齊哈爾的34份ITS陽(yáng)性樣本進(jìn)行多位點(diǎn)分型的研究。這34個(gè)陽(yáng)性樣本的ITS基因型為BEB6、CS-4和NESH1-NESH3。系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示基因型BEB6具有宿主特異性(host-adapted)，而基因型CS-4和NESH1-NESH3具有人獸共患潛力(

6、zoonoticpotential)。MLST的巢式PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示:在MS1位點(diǎn)得到6個(gè)陽(yáng)性，產(chǎn)生6個(gè)基因型;MS7位點(diǎn)得到3個(gè)陽(yáng)性，得到2個(gè)基因型;其它位點(diǎn)并未擴(kuò)增出陽(yáng)性。系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示具有宿主特異性的BEB6分離株在MS1和MS7位點(diǎn)上與人分離株親緣關(guān)系相近，這與在ITS位點(diǎn)上得到的系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果不一致。這一結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了遺傳組2中的曾被認(rèn)為具有宿主特異性的基因型BEB6具有人獸共患潛力。
　　本研究通過(guò)巢式PCR對(duì)

7、十二指腸賈第蟲(chóng)磷酸丙糖異構(gòu)酶基因(TPI)、谷氨酸脫氫酶基因(GDH)和β-賈第素基因(BG)三個(gè)基因位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增?；赥PI位點(diǎn)的巢式PCR擴(kuò)增檢測(cè)到11個(gè)陽(yáng)性，感染率為2.2％，基于BG位點(diǎn)，檢測(cè)到5個(gè)陽(yáng)性，感染率為1.0％。而基于GDH位點(diǎn)并未檢測(cè)到陽(yáng)性。共鑒定出2個(gè)類(lèi)群，包括人獸共患類(lèi)群A和反芻獸特異的類(lèi)群E。
　　針對(duì)小亞基核糖體RNA（SSU rRNA）基因內(nèi)部多態(tài)區(qū)進(jìn)行巢式PCR擴(kuò)增，對(duì)從黑龍江省三個(gè)地區(qū)采集到的48