紫花地丁提取物對(duì)耐環(huán)丙沙星大腸桿菌耐藥性消除作用研究.pdf

1、目的：觀察中藥紫花地丁提取物對(duì)大腸桿菌環(huán)丙沙星耐藥性的消除作用。方法：通過(guò)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株Ksss人工誘導(dǎo)獲得兩株環(huán)丙沙星耐藥株，Kssc、K88z，并從臨床分離的菌株中選取了一多重耐藥株RC，以此作為本試驗(yàn)的受試菌株。采用微量棋盤稀釋法測(cè)定紫花地丁與環(huán)丙沙星的聯(lián)合抑菌濃度指數(shù)(FIC)；以紫花地丁提取物為消除劑，以SDS作為對(duì)照，采用影印培養(yǎng)法，質(zhì)粒提取及瓊脂糖凝膠電泳觀察紫花地丁提取物對(duì)耐環(huán)丙沙星大腸桿菌耐藥質(zhì)粒的消除；觀察紫花地丁提取物

2、亞抑菌濃度培養(yǎng)的大腸桿菌對(duì)環(huán)丙沙星的耐藥性消除率；采用熒光測(cè)定法測(cè)定環(huán)丙沙星在細(xì)菌體內(nèi)的蓄積濃度，觀察紫花地丁提取物對(duì)環(huán)丙沙星在菌體內(nèi)蓄積量的影響。 結(jié)果：紫花地丁提取物與環(huán)丙沙星聯(lián)用時(shí)對(duì)大腸桿菌Ks8s，Kssc，K88z，RC，所測(cè)定FIC指數(shù)均為0．5～1，表明二者具有相加作用。 紫花地丁提取物亞抑菌濃度作用24h，對(duì)耐藥菌株Kssc，KBsz，RC的消除率分別為O．6％、O．8％和1．2％；延長(zhǎng)作用至48小時(shí)，消

3、除率分別為分別為1．O％、O．8％和1．4％。而對(duì)照組SDS(100p．g／m1)作用24h，的消除率分別為O．8％、O．8％和1．2％；延長(zhǎng)作用至48小時(shí)，其消除率可分別提高為1．4％、1．8％和2．O％。經(jīng)X2檢驗(yàn)，兩種藥物對(duì)細(xì)菌耐藥性的消除率差異不顯著。消除子進(jìn)行質(zhì)粒抽提，經(jīng)瓊脂凝膠糖電泳后，結(jié)果顯示，臨床分離的多重耐藥株RC丟失了部分的質(zhì)粒條帶，而誘導(dǎo)耐藥株的質(zhì)粒條帶無(wú)變化。 加入紫花地丁提取物培養(yǎng)后，K88c、RC菌體

4、內(nèi)環(huán)丙沙星穩(wěn)態(tài)濃度均較未加時(shí)增加，而ATCC25922和K88s菌體內(nèi)環(huán)丙沙星濃度上升不明顯。加入外輸泵抑制劑氰氯苯腙(CCCP)后，K88c、RC菌體內(nèi)環(huán)丙沙星濃度隨時(shí)間的延長(zhǎng)而遞增，并保持高水平的穩(wěn)態(tài)濃度，與未加CCCP時(shí)有顯著性差異。而敏感菌株ATCC25922、K88s不論有無(wú)CCCP存在，菌體內(nèi)環(huán)丙沙星濃度都隨時(shí)間的延長(zhǎng)而呈遞增趨勢(shì)。 結(jié)論：試驗(yàn)結(jié)果提示紫花地丁提取物和環(huán)丙沙星聯(lián)合應(yīng)用有相加作用；能降低細(xì)菌對(duì)環(huán)丙沙星的