HnRNPB-,1-基因特異性SiRNA對肺癌細(xì)胞A549端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶影響的研究.pdf

1、目的:肺癌是當(dāng)今世界上嚴(yán)重威脅人類健康和生命的惡性腫瘤，在癌癥死亡中肺癌是男性和女性死亡的主要原因?，F(xiàn)已證實(shí)肺癌細(xì)胞及肺癌組織HnRNPB<,1>表達(dá)明顯增高。且HnRNPB<,1>可與端粒重復(fù)序列結(jié)合，并參與端粒酶介導(dǎo)的端粒長度的維持，提示HnRNPB<,1>可能通過調(diào)節(jié)端粒酶活性，維持端粒長度，使細(xì)胞持續(xù)分裂而永生化。hTERT是端粒酶的主要活性成分，其表達(dá)與肺癌端粒酶活性密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)通過觀察肺癌細(xì)胞A549HnRNPB<,1>

2、基因沉默前后hTERT活性的變化，及其與肺癌細(xì)胞A549凋亡的關(guān)系，為探討HnRNPB<,1>在肺癌發(fā)生發(fā)展中的分子機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:采用通過RNA干擾技術(shù)抑制HnRNPBl基因表達(dá)的肺癌細(xì)胞株A549為研究對象，并根據(jù)干擾的HnRNPB<,1>基因不同的靶序列，將實(shí)驗(yàn)組分為四組(A、B、C、D組)。對照組為轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的A549細(xì)胞(E組)和未轉(zhuǎn)染任何質(zhì)粒的A549細(xì)胞(F組)。用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)觀察HnRNPB<,1>SiR

3、NA對肺癌細(xì)胞A549凋亡的影響；采用RT-PCR和免疫細(xì)胞化學(xué)的方法分別檢測肺癌細(xì)胞A549 HnRNPB<,1>基因沉默前后hTERT的tuRNA和蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果: (1)HnRNPB<,1>對肺癌細(xì)胞A549周期和凋亡的影響：HnRNPB<,1>SiRNA具有抑制肺癌細(xì)胞增殖、促進(jìn)凋亡的作用，實(shí)驗(yàn)組凋亡率較對照組明顯增加，分別為A組(19.2±1.25)％、B組(23.4±3.12)％、C組(24.0±2.2

4、8)％、D組(33.5±2.49)％，而對照組凋亡率僅(8.7±1.86)％、(9.1±2.21)％。且實(shí)驗(yàn)組S期細(xì)胞分別為A組(27.0±2.97)％、B組(25.4±3.65)％、C組(24.2±4.12)％、D組(19.6±3.56)％，較對照組明顯減少； (2)HnRNPBl對肺癌細(xì)胞A549 HnRNPBl mRNA的影響：RT-RCR結(jié)果顯示：HnRNPBl SiRNA能夠降低肺癌細(xì)胞A549 HnRNPB mRNA

5、的表達(dá)，在實(shí)驗(yàn)組HnRNPB mRNA的抑制率分別為：77.69％、74.37％、75.65％和83.04％； (3)HnRNPBl對肺癌細(xì)胞A549 hTERT mRNA表達(dá)的影響：RT-RCR結(jié)果顯示：HnRNPBl SiRNA能夠降低肺癌細(xì)胞A549 hTERTmRNA的表達(dá)，在實(shí)驗(yàn)組hTERT mRNA的抑制率分別為88.67％、90.67％、91.33％、86.67％，而空質(zhì)粒組hTERT mRNA表達(dá)未受抑制；

6、 (4)HnRNPB<,1>對肺癌細(xì)胞A549 hTERT蛋白表達(dá)水平的影響：免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示，各實(shí)驗(yàn)組hTERT蛋白陽性表達(dá)率較對照組明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示HnRNPB<,1> SiRNA能夠降低hTERT蛋白的表達(dá)； (5)相關(guān)性分析提示HnRNP B<,1> mRNA的表達(dá)和hTERT mRNA的表達(dá)成明顯的正相關(guān)，而HnRNP B<,1> mRNA和hTERT mRNA的表達(dá)與細(xì)胞凋亡率成負(fù)相關(guān)。 結(jié)