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文檔簡介
1、酞酸酯是一類環(huán)境激素。它干擾生物體內(nèi)保持平衡并調(diào)節(jié)生長過程的激素正常的產(chǎn)生、釋放、轉(zhuǎn)移、代謝、反應(yīng)和消除,或引起生物后代不健康的影響和內(nèi)分泌功能的改變。
免疫檢測技術(shù)是國內(nèi)外小分子快速檢測的重要領(lǐng)域之一。本文針對鄰苯二甲酸二辛酯的結(jié)構(gòu)設(shè)計、合成了一種半抗原,并制備得到了一種抗原。用原料4-硝基鄰苯二甲酸經(jīng)過與正辛醇進行酯化反應(yīng),得到4-硝基鄰苯二甲酸二辛酯。通過將苯環(huán)上的硝基還原形成苯環(huán)上具有氨基的半抗原,用重氮化法將此氨
2、基偶聯(lián)到載體蛋白牛血清蛋白(BSA)作為免疫抗原(DOP-BSA),用重氮化法將此氨基偶聯(lián)到載體蛋白卵清蛋白(OVA)作間接ELISA反應(yīng)的包被原(DOP-OVA)。用紫外/可見分光光度計對合成的人工抗原進行鑒定,與半抗原和偶聯(lián)物、蛋白的掃描結(jié)果進行比較,結(jié)果顯示偶聯(lián)物具備半抗原和蛋白的雙重特征吸收峰,因此可以判斷偶聯(lián)成功,并估算免疫原和包被原的偶聯(lián)比分別為18和7.5。
用上述合成的人工免疫抗原(DOP-BSA)免疫兩只
3、新西蘭大白兔,制備出抗血清,效價依次為48000、12000,針對與半抗原結(jié)構(gòu)最相似的鄰苯二甲酸二辛酯,建立間接競爭ELISA檢測方法并對包被時間、封閉時間、抗體的工作量、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液甲醇含量、競爭時間、顯色時間等條件進行優(yōu)化。包被原的稀釋倍數(shù)為1600,抗體工作濃度為血清稀釋4000倍,IC50為19.2ng/mL,檢測限為1.9ng/mL,線性范圍為5-75ng/ml,并在此條件對3種酞酸酯和類似物進行交叉反應(yīng)試驗,達到對鄰苯二甲酸
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