轉化生長因子β1與支氣管哮喘及哮喘相關表型關系的研究.pdf

1、哮喘是多基因參與的具有遺傳易感性的一組臨床綜合癥，受到基因-基因、基因-環(huán)境交互作用的影響。哮喘的兩大特征是氣道慢性非特異性炎癥和氣道重塑，臨床上以血清IgE增高、肺組織嗜酸性粒細胞浸潤、黏膜高分泌和氣道高反應為主要表現(xiàn)。盡管對這一復雜疾病有了一定了解，但其具體發(fā)病機制仍不清楚。 轉化生長因子β1(ttroisforming growth factor-β1，TGF-β1)是一種多功能細胞因子，具有抗炎和促炎雙重作用而參與哮喘氣

2、道炎癥與免疫應答。另外，TGF-β1又因其獨特的促纖維化作用而參與哮喘的氣道重塑，因而與哮喘的關系十分密切。但是TGF-β1在哮喘發(fā)生發(fā)展中究竟扮演怎樣的角色，各家意見不一，有必要對其進一步深入研究。 CD4+CD25+調節(jié)性T細胞(Treg)在維持免疫穩(wěn)態(tài)中有重要作用，其表面分子膜型TGF-β1在介導細胞接觸免疫抑制機制中發(fā)揮極其重要的作用。關于CD4+CD25+調節(jié)性T細胞表面膜型TGF-β1的表達與哮喘及哮喘相關表型的關系

3、尚未見報道。 做為哮喘的候選基因，TGF-β1單核苷酸基因多態(tài)性(singlenucleotide polymorphism，SNP)與哮喘及其相關表型的關系被廣泛研究，但是不同的研究其結果并不一致甚至截然相反。目前尚無關于中國東南部漢族人群TGF-β1SNP/單倍型以及和其他基因交互作用對哮喘發(fā)病危險度影響的報道，也尚無TGF-β1SNP/單倍型與哮喘臨床表型相關性研究的報道。 鑒于此，本研究將從這幾方面入手，揭示TG

4、F-β1與哮喘及哮喘相關表型的關系，進一步闡明TGF-β1在哮喘發(fā)生發(fā)展中的作用。 第一部分膜型TGF-β1和其他表面標志在過敏性哮喘患者外周血CD4+CD25high調節(jié)性T細胞上的表達以及吸入激素對其的影響 CD4+CD25+調節(jié)性T細胞(Treg)能通過其表面分子如TGF-β1、細胞毒T淋巴細胞相關抗原4(CTLA-4)和糖皮質激素誘導的腫瘤壞死因子受體家族相關蛋白(GITR)發(fā)揮細胞-細胞接觸性免疫抑制，但是對T

5、reg在哮喘發(fā)病機制中的確切作用仍知之甚少。 目的：比較過敏性哮喘患者和正常人外周血Treg表面分子表達之間的差異，以及吸入激素對其的影響，同時分析這些表面分子表達與哮喘表型的相關性。 方法：用流式細胞技術檢測CD4+CD25high Treg表面分子的表達。體內和體外實驗觀察吸入激素對Treg表面分子表達的影響。血漿總IgE和超敏C反應蛋白(hsCRP)分別用ELISA和乳膠增強免疫比濁法測定。 結果：急性期乖

6、穩(wěn)定期過敏性哮喘患者外周血Treg的數(shù)量與正常人相似。與CD4+CD25-T細胞相比，Treg優(yōu)先表達TGF-β1/LAP、CTLA-4、GITR、TLR4和FOXP3。急性生期哮喘患者的CD4+CD25highLAP+T細胞數(shù)量較穩(wěn)定期患者和正常人顯著減少。吸入激素治療可使CD4+CD25highLAP+T細胞比例增加，在體外受激素刺激后能增殖并呈劑量依賴關系。另外，CD4+CD25highLAP+T細胞比例與哮喘患者血漿總IgE及哮

7、喘嚴重度分級呈負相關，與FEV1％呈正相關。 結論：結果顯示膜型TGF-β1可能是一個預測哮喘嚴重度的有效指標，并且可能與哮喘持續(xù)緩解有關。針對Treg表面分子(尤其是TGF-β1)的策略可能是將來哮喘治療有希望的手段。 第二部分TGF-β1單核苷酸多態(tài)性與哮喘易感性的關系以及和CD14之間的交互作用 哮喘是多基因控制的具有遺傳易感性的疾病。TGF-β1是哮喘候選基因之一，雖然有不少關于TGF-β1單核苷酸多態(tài)性

8、(SNP)與哮喘易感性的相關性研究，但是結果卻很不一致。 目的：研究在中國東南部漢族人群中TGF-β1 SNP/單倍型與哮喘發(fā)病危險性的關系，以及TGF-β1與CD14之間的基因-基因交互作用對哮喘易感性的影響。 方法：連續(xù)性招募318名哮喘患者和352名正常志愿者。挑選TGF-β1三個多態(tài)性位點rs1800469、rs1982073和rs12983047，CD14一個位點rs2563298，采用SNPstream(R)

9、和TaqMan(R)SNP分型法進行基因分型。通過病例-對照設計分析這些位點和哮喘易感性的關系，以及TGF-β1與CD14之間的基因-基因交互作用。 結果：TGF-β1三個多態(tài)性位點以及CD14的一個位點的等位基因、基因型頻率在哮喘組和對照組中沒有差別。TGF-β1單倍型分析與哮喘的發(fā)病危險度也無相關性。TGF-βrs1800469和CD14 rs2563298之間有強烈的交互作用(校正OR=8.23，95％CI=2.68-25

10、.30)，同時攜帶TGF-β1 rs1800469 TT和CD14 rs2563298 CA/AA基因的人群發(fā)生哮喘的危險性要比同時攜帶TGF-β1 rs1800469 TT和CD14rs2563298 CC者低81％(校正OR=0.19.95％CI=0.07-0.55)。rs1982073和rs1800469之間高度連鎖(D’=1.99)，因而與CD14rs2563298之間也有相等強度的交互作用。 結論：中國東南部漢族人群中

11、，TGF-β1單核苷酸基因多態(tài)性單獨與哮喘易感性無相關性，但和CD14之間存在交互作用，共同影響哮喘的發(fā)生。這對篩選哮喘高危人群和哮喘的預防有重要意義。 第三部分TGF-β1單核苷酸多態(tài)性與哮喘相關表型的關系 雖然在中國東南部漢族人群中，TGF-β1單核苷酸基因多態(tài)性與哮喘易感性無相關性(見第二部分)，但是有部分研究顯示TGF-β1單核苷酸多態(tài)性與哮喘的一些臨床表型相關。 目的：探討TGF-β1 SNP與中國東南部漢

12、族哮喘患者外周血CD4+CD25highLAP+T細胞比例、血漿總IgE、血漿TGF-β1、外周血嗜酸性粒細胞、肺功能、過敏原皮膚點刺試驗(SPT)及哮喘嚴重度分級的關系。 方法：連續(xù)性招募318名哮喘患者。挑選TGF-β1三個多態(tài)性位點rs 1800469、rs1982073和rs12983047，采用SNPstream(R)和TaqMan(R) SNP分型法進行基因分型。CD4+CD25high曲LAP+T細胞比例用流式細胞

13、技術檢測，血漿總IgE和TGF-β1水平采用ELISA測定。通過單純病例設計分析TGF-β1 SNP和哮喘相關臨床表型的關系。 結果：和TT或TC基因型相比，攜帶rs1800469 CC基因型的哮喘患者外周血CD4+CD25highLAP+T細胞比例明顯增高(P<0.001)。同樣，攜帶rs1982073 TT基因型的哮喘患者該細胞群的比例較CC和CT者高(P<0.001)。rsl2983047 AG/GG攜帶者的FEV1/FV